XRCC5调控miR-138加工成熟的机制研究

目前关于microRNA的研究大多集中于成熟microRNA对靶基因的调控和microRNA表达谱的变化,但是关于microRNA成熟加工调控机制的研究报道相对较少。miR-138成熟体在神经组织特异分布,在其它组织细胞中难以检测到,但是其前体（pre-miR-138）却在大多数组织中大量存在,显然miR-138的成熟加工受到未知调控。课题申请人通过实验钓取到一种蛋白，鉴定为XRCC5,能够特异结合pre-miR-138，并在体内抑制pre-miR-138的剪切成熟；同时新发现了miR-138有可能负调控miRNA成熟的关键蛋白Dicer。本课题将在前期工作基础上深入研究XRCC5调控miR-138成熟的机制，并结合miR-138与Dicer构成的反馈调节通路，探讨一种依赖于XRCC5，miR-138和Dicer的新microRNA加工成熟调控机制。

本研究通过RNA-IP和深度测序揭示了XRCC5（Ku80）和XRCC6（Ku70）所调控的miRNA序列具有显著一致性，说明XRCC5和XRCC6可能以完整的异二聚体形式参与调控miRNA的生物合成。进一步研究证明了Ku蛋白的表达水平直接影响上述microRNA的表达含量；Ku蛋白能够与双链的RNA结合，包括pre-miRNA和miRNA二聚体；Ku蛋白能够解旋miRNA二聚体，具有RNA解旋酶活性。另一方面，我们深入研究了miR-138在HeLa细胞中的生物学功能。我们发现miR-138能够特异靶向RMAND5A，从而影响Exportin-5的稳定性，进一步调控了众多pre-miRNA的出核。另外本课题还增加了miR-200b在树突状细胞（DC ）中的功能研究以及miR-152在动脉粥样化病人血清和正常人血清中的差异研究。