P38 MAPK路径参与真菌性角膜炎发病机制的实验研究

真菌性角膜炎是较常见的难治性致盲眼病，发病率在我国有上升趋势，即使联合角膜移植手术，预后仍较差。目前真菌性角膜炎发病机制尚不明了。丝裂原蛋白激酶参与基因表达、有丝分裂、细胞生存和凋亡等重要生理功能，P38 MAPK信号路径是该家族的重要成员，在炎症反应过程中发挥重要作用，是抗炎治疗新型靶点之一。本组曾对真菌性角膜炎的发病机制从多角度进行系统研究，前期实验发现在真菌性角膜炎过程中P38 MAPK路径活化，其下游分子表达增强，参与炎症反应。因此设想经SC80036（P38 MAPK抑制剂）抑制该信号路径的活化，从而达到阻断炎症反应过程中多种细胞因子的上调过程，以达到抑制炎症反应，改善预后的目的。本研究旨在了解P38MAPK路径在真菌性角膜炎过程中的变化规律，从宏观和微观角度了解抑制该路径对疾病发生过程的影响，为揭示真菌性角膜炎发病机制及治疗提供新思路。

感染性角膜病是重要的全球性致盲眼病，在严重的角膜溃疡病例中，真菌性角膜炎是最重要的原因，特别是在发展中国家。在我国真菌性角膜炎发生率近年来有上升趋势，特别是随着外伤增多、广谱抗生素和激素的滥用，及角膜接触镜的应用增多，同时随着健康体系的完善，眼科医师对真菌感染的认识增强。.本组近期从事真菌性角膜炎发病机制的研究，力图从分子水平揭示其发生过程，特别是疾病早期相关分子路径的调节机制，通过人为改变某些关键分子或者是关键路径，改变疾病的进展，从而达到改进预后的目的。在本项研究的进展过程中，取得一定的研究结果，现汇报如下：.1..建立了真菌感染角膜炎的小鼠模型，应用基因芯片技术系统地分析了真菌性角膜炎小鼠模型宿主基因的改变。在基因芯片Affymetrix Genechip430.2检测的45,102个备选基因中，真菌性角膜炎角膜与对照组角膜相比较，有4，022个基因（8.92%）有显著性改变（p<0.05），且上调或下调超过两倍以上。.2..研究发现在小鼠模型，众多趋化因子在角膜真菌感染早期基因表达发生显著性改变。接受抗-CCL3抗体治疗后，真菌性角膜炎小鼠角膜炎临床表现减轻，感染角膜炎症侵润减少，部分炎症相关细胞因子表达下调，培养角膜上皮细胞在灭活真菌刺激下，表达CCL3明显上调。该结果提示CCL3中和抗体对改善真菌性角膜炎预后有一定作用，其可作为真菌性角膜炎治疗的潜在新型靶点之一。.3..研究证明人角膜上皮细胞表达至少两组抗微生物肽LL-37和β-防御素。LL-37, hBD2 和hBD3 在热灭活白色念珠菌的刺激下表达升高。通过药物和基因治疗调节这些多功能抗微生物肽的表达水平，能够提供一个治疗真菌性角膜感染的新方法。.4..本研究显示P38参与角膜感染的生物过程，特别是角膜上皮细胞受到酵母菌感染。P-P38抑制剂SB203580能在一定程度上减少HCEC受到HKCA刺激后ROS产量，该过程通过下调HMOX1、PTGS2的基因表达，以及蛋白的表达，提示P38 MAPK路径在角膜上皮细胞受到刺激后的氧化损伤应激中发挥作用，药物抑制P38在一定程度上减少ROS生成，该过程参与P38 MAPK众多生理病理过程的重要组成部分。