Survivin-RNA基因沉默增强胃癌细胞对中药三物白散敏感性的研究

Gastric cancer is one of the most common malignant tumor in our country. Its incidence is in the fourth place of malignant tumors, mortality is second.The occurrence and development of gastric cancer is resulted from.a variety of the activation of proto-oncogene and the inactivation of tumor suppressor genes.It is the result of a variety of genetic changes accumulate. Among the genes survivin is a unique new structure at IAP family. It has strong resistance to apoptosis. Our previous study found that Sanwubai Powder can inhibit the expression of Survivin gene to achieve the effect of anti-tumor, but compared with the conventional chemotherapy drugs, the antitumor efficacy of traditional Chinese medicine (TCM).is still general, therefore,the study how to improve the tumor sensitivity to the traditional Chinese medicine (TCM) is of great significance. Experimental studies have shown that gene silencing technology can restrain the excessive expression of oncogenes,cancer related genes and.mutatied genes, thus inhibiting occurrence.and development of tumor. Studies have found that Cdx2 gene silencing can strengthen the sensitivity of gastric cancer cells to the traditional Chinese medicine (TCM). But there has no reportes if Survivin gene silencing can enhance gastric cancer cells to the sensitivity of the anti-tumor Chinese medicine. This project employs Survivin gene silencing transfecting gastric cancer cells for research, explore if Survivin gene silencing can enhance gastric cancer cells sensitivity to Chinese medicine, which has an important significance to clarify Survivin gene silencing mechanism, and lay a foundation for improving the treatment of gastric cancer curative effect.

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在恶性肿瘤中占第四位，死亡率居第二位。胃癌 的发生、发展是多种原癌基因的活化和多种抑癌基因的失活造成的，是多种遗传改变累积的结 果。其中Survivin 是 IAP 家族中一个结构独特的新成员，它具有强大的抗细胞凋亡功能。我 们的前期研究发现三物白散可以抑制Survivin基因的表达达到抗肿瘤的效果，但与常规化疗药 物相比，中药抗肿瘤的疗效仍是一般，因此，研究如何提高肿瘤对中药抗肿瘤的敏感性具有重 要意义。曾有研究发现Cdx2 基因沉默可以增强胃癌细胞对中药的敏感性，而Survivin基因沉 默能否能够增强胃癌细胞对中药抗肿瘤的敏感性，这方面尚未见相关报道，本项目拟用Surviv in基因沉默转染胃癌细胞进行研究，探索Survivin基因沉默能否增强胃癌细胞对中药敏感性的 问题，对阐明其机制有重要意义，为提高胃癌治疗疗效奠定基础。

胃癌是源自胃肠道黏膜上皮的恶性肿瘤，严重危害着人类健康，前期我们运用三物白散治疗胃癌取得了良好的临床效果，亦从分子生物学角度证明三物白散含药血清对胃癌细胞增殖、凋亡及 survivin 基因表达具有影响，但其作用机制尚不清楚，本课题亦是对我们前期研究的延续和深入，本项目拟在 survivin基因沉默转染胃癌细胞的动物实验基础上，通过采用 Western blot 方法检测 survivin 蛋白表达变化；用 RT-PCR 检测沉默 survivin 基因对 caspase3 和 caspase7 表达及细胞凋亡的影响；MTT 方法检测细胞的增殖抑制率；流式细胞仪检测细胞的凋亡等来论证基因沉默转染组能否提高胃癌细胞对中药三物白散的敏感性，探讨其作用机制于caspase3和caspase7 表达的相关性。.研究的重要结果：（1）Survivin基因沉默抑制胃癌裸鼠移植瘤生长的实验研究显示：Survivin基因沉默胃癌SGC-7901细胞移植于裸鼠皮下建立移植瘤模型可抑制胃癌裸鼠移植瘤生长，降低Survivin 蛋白表达，增加肿瘤组织细胞的凋亡率。（2）Survivin基因过表达联合三物白散对胃癌SGC-7901裸鼠移植瘤生长、凋亡影响的实验显示,：Survivin基因过表达可以增长胃癌裸鼠移植瘤生长，增加Survivin 蛋白表达，减少肿瘤组织细胞的凋亡率。而经过中药干预后，胃癌裸鼠移植瘤生长有所抑制，Survivin 蛋白表达下降，肿瘤组织细胞的凋亡率上升，可见三物白散确实可以起到抑制胃癌细胞生长的作用，并且本实验还确定建立SGC-7901 Survivin基因过表达稳定细胞株的方法，后期研究可延用。（3）Survivin基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖、克隆形成的影响及其机制研究实验显示：中药+Survivin-RNAi-LV组对SGC-7901细胞的增殖抑制率，SGC-7901细胞的克隆形成，胃癌SGC-7901细胞凋亡与迁移均优于其余对照组，可见Survivin基因沉默可增强胃癌SGC-7901细胞对中药三物白散敏感性，其机制与Survivin作用于Caspase-3和Caspase-7相关。.本项目选择临床用于治疗胃癌症多年，安全性高、疗效好的三物白散，深入研究其与Survivin基因沉默的相互关系为新药开发奠定了良好的基础。研究成果具有学术价值与实用