基于炎症与免疫多靶网络的骨骼风痛片中治疗类风湿性关节炎的活性组分研究

Rheumatoid arthritis is a chronic, immune-mediated disease characterized by a deforming symmetrical polyarthritis of varying extent and severity. It causes premature mortality, disability and is one of the refractory diseases in the world. Guge Fengtong Tablet is a well-known traditional Chinese patent medicine and composes of Dioscorea nipponica Rhizoma, Spatholobi Caulis and Zingiberis Rhizoma. Modern pharmacological studies and clinical applications have shown that Guge Fengtong Tablet is significantly effective for the treatment of rheumatoid arthritis. However, its active components responsible for the efficacy are not clear and their targets are not clarified which limit the widespread use of Guge Fengtong Tablet. Based on inflammation and immune multi-target network and multi-disciplinary technology, this project focuses on the investigation of active components with anti-rheumatoid arthritis activity from Guge Fengtong Tablet by component-based knock-out/knock-in strategy, as well as the in vivo metabolism of active constituents. This project may lay a foundation for developing innovative drugs with clear composition and proportion from Guge Fengtong Tablet for the treatment of rheumatoid arthritis. It may also provide new strategy and idea for investigating complex Chinese medicine system.

类风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病，对人体健康危害极大，是目前我国众多难治性疾病之一。由穿山龙、鸡血藤、干姜三味药组成的中药大品种药物骨骼风痛片，临床应用表明其对类风湿性关节炎具有显著疗效，但其化学成分不清楚、药效物质基础不明确，作用靶点没有阐明，使其在临床应用中受到一定限制。本项目以骨骼风痛片为研究载体，融合多学科技术，开展"基于炎症与免疫多靶网络的骨骼风痛片中治疗类风湿性关节炎的活性组分研究"，在整体化学成分表征的基础上，采用目标成分敲出/敲入策略，深入发掘骨骼风痛片中治疗类风湿性关节炎的活性组分/成分，同时研究活性组分在体内的代谢处置规律，为开发出成分群明确、比例清楚、质量可控的治疗类风湿性关节炎的创新中药奠定基础。本项目将为从中药复杂体系中开发创新组合药物提供新的研究思路和方法，对类风湿性关节炎重大疾病的治疗将具有重大的意义。

本研究采用采用HPLC-MS技术对骨骼风痛片的化学成分进行定性定量分析，共鉴定了47个化学成分，揭示了骨骼风痛片的化学物质基础，应用基质固相分散提取技术和UPLC-MS/MS分析技术对骨骼风痛片中8个主要成分进行了多成分定量研究，为骨骼风痛片的质量控制提供了快速、有效的分析方法。在明确化学成分的基础上，通过建立大鼠佐剂性关节炎模型，结合急性炎症、镇痛和脂多糖诱导巨噬细胞炎症等模型，确证了骨骼风痛片有很好的抗炎和镇痛作用。.本研究采用HPLC-MS/MS技术同时测定了鸡血藤中16个酚类化合物的含量，其中包括5个黄烷醇、7个异黄酮、3个黄酮和1个查尔酮类化合物，并采用主成分分析法（PCA）将对不同产地的样品进行区分，结果显示鸡血藤与混用品大血藤存在明显差异。该方法从多成分分析角度对鸡血藤药材质量进行研究，为鸡血藤的质量控制提供了科学依据；利用HPLC-Q-TOF/MS技术，开展骨骼风痛片体内代谢研究，给药后从大鼠尿液汇总鉴定22个原型化合物；经过筛选确定骨骼风痛片中对NO释放抑制较为明显，且对NF-κB通路有较明显的抑制作用的化合物为其主要活性成分，为：染料木素，橙皮素，柚皮素，鹰嘴豆牙素A，6-姜酚，8-姜酚，6-姜烯酚，薯蓣皂苷，原纤细薯蓣皂苷及伪原薯蓣皂苷。机制研究显示，骨骼风痛片及十成分组合对LPS诱导的RAW264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α三种炎症因子的分泌均有显著抑制作用，能使iNOS蛋白表达显著降低，且显著抑制p65和IκB-α的磷酸化与p65蛋白的入核，对于MAPK的磷酸化也有一定抑制作用。综上所述，骨骼风痛片抗炎作用机制主要与NF-κB、MAPK等信号通路有关。