表观遗传沉默BCL6B抑制TGF-β信号通路促进肝癌侵袭转移的机制研究

Although liver transplantation, surgical resection, percutaneous thermal ablation and transcatheter hepatic artery chemoembolization are effective treatments for hepatocellular carcinoma (HCC), but the high recurrence and metastasis rate seriously restrict the long-term prognosis. Therefore, finding clinically valuable biological marker for prognosis prediction is a problem demanding prompt solved. BCL6B is regarded as a potential tumor suppressor and methylation of BCL6B may serve as a poor prognosis marker in some solid tumors. In our previous study of the biological information analysis, EGR1 is the downstream target gene of BCL6B with rich GC structural units and regulate gene transcription. It is reported that EGR1 could activate the TGF-β signaling for inhibition cell proliferation, invasion and metastasis. Therefore, in this study, the role of BCL6B methylation in predication recurrence and matastasis is analyzed for early HCC after thermal ablation. By exploring the mechanism of epigenetic silencing BCL6B inactivates TGF-β signaling via EGR1 and causes human HCC cell invasion and metastasis, in order to search potential therapy targets for HCC, which is expected to provide a new method for the treatment of recurrence and metastases after thermal ablation.

尽管肝移植、手术切除、经皮热消融治疗及经导管肝动脉化疗栓塞术等手段为有效的治疗方法，然其术后的高复发及转移率严重制约其远期疗效。因此，临床上亟需发现对肝癌预后预测有价值的生物学标志物。BCL6B作为抑癌基因，并受甲基化调控，与多种肿瘤不良预后相关。在前期生物学信息分析中发现，EGR1为BCL6B的下游靶基因，该基因包含多个富含GC元件的结构单元，调节基因的转录。有文献报道EGR1可激活TGF-β信号通路抑制细胞增殖及侵袭转移。本项目旨在研究BCL6B甲基化对早期肝癌热消融治疗后的复发转移的预测价值；进一步探讨表观遗传沉默BCL6B通过下调EGR1抑制TGF-β信号通路促进肝癌细胞侵袭转移的作用机制，以期寻找表观遗传学治疗肝癌的潜在靶点，为肝癌的预后预测及临床治疗提供新方法。

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC) 是全球及我国的常见恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升趋势。肝移植及手术切除治疗是有效的治疗方法；经皮微波或射频等消融治疗及经导管肝动脉化疗栓塞术等手段为失去手术机会的患者提供了有效治疗方法，并在一定程度上达到了与外科治疗相媲美的效果。然而，由于HCC复发转移率高，肝移植、手术切除或多种微创治疗的远期疗效均不理想，其五年复发转移率高于50%。HCC的发生、发展、转移及复发机制目前尚不明确。既往研究表明遗传学和表观遗传学的改变在HCC的发生发展过程中均具有重要作用。BCL6B甲基化是HCC的频发事件，其表达受该基因启动子区甲基化调控，BCL6B的甲基化与乙型肝炎病毒感染阳性相关，提示BCL6B的甲基化是HCC诊断的潜在的标志物。在肝癌细胞系HepG2及SNU449中恢复BCL6B的表达后，经过Micro array分析，发现EGR1为上调倍数最高，并且与癌症相关性最密切的下游靶基因及相关信号通路，并通过Western Blot方法在肝癌系中进行验证EGR1的表达及其相关信号通路（P53及TGF-β）。该研究中分析了在C57BL/6小鼠肝脏表面接种Hep1-6肿瘤细胞系，从而构建原发性肝癌小鼠模型，对肿瘤病灶进行MWA，评价治疗后不同时间点检测小鼠系统免疫变化情况。利用流式细胞术检测技术，发现脾脏中CD4+T、CD8+T及CD8+PD1+T细胞的变化情况，提示MWA可增加肿瘤浸润免疫微环境的抗肿瘤能力，为MWA联合表免治疗肝癌奠定基础。