乳腺癌中AP-1信号通路新型调节因子的功能研究

AP-1（activator protein 1）是一类核转录因子，通过蛋白质间相互作用在乳腺癌等多种肿瘤的发生发展中发挥极其重要的作用。尽管已发现一些与AP-1相互作用的蛋白质，但只能部分解释乳腺癌等肿瘤发生发展机制，且许多与AP-1相互作用的蛋白质的临床意义不清楚。为阐明与AP-1相关的乳腺癌的发生机制，我们利用GST pull-down 、免疫共沉淀和报告基因技术发现新型的与AP-1的重要成员c-Fos相互作用的蛋白质RBPMS。在此基础上，我们拟进一步定位RBPMS与c-Fos间相互作用的区域/结构域；利用报告基因、RT-PCR、Western blot、EMSA、染色质免疫沉淀、RNA干扰等技术确定它们间相互作用的下游靶标及其分子机制；检测RBPMS对乳腺癌细胞生长、侵袭和转移的影响；确定RBPMS在乳腺癌中的临床意义，为阐明乳腺癌发病机理及发现新的乳腺癌诊断和治疗靶标打下基础。

激活蛋白（AP-1）是一类即刻早期应答基因编码的核转录因子。在哺乳动物细胞中，AP-1主要由Jun和Fos异源二聚体组成，在肿瘤的发生发展中具有重要作用。与AP-1家族相互作用是调节AP-1活性的重要方式之一。RNA结合蛋白（RBP）属于RNA结合蛋白家族，但RBP在肿瘤发生发展中的作用还不清楚。本研究首先确定乳腺癌中RBP三种剪切体的内源表达情况，发现RBP1和RBP2是常见的剪切体形式。随后我们探讨了RBP1和RBP2对AP-1转录活性及其下游基因表达的影响，确定其在肿瘤细胞生长调节中的作用。. 转录活性实验表明，RBP1和RBP2均可以抑制AP-1活性，且通过c-Fos/c-Jun依赖方式调节AP-1活性。RBP1和RBP2可以使肿瘤细胞中与侵袭与转移相关的AP-1靶基因表达水平下降。免疫共沉淀、GST pull-down、激光共聚焦等实验均证明RBP1与c-Fos存在着特异的相互作用，不与Fos和Jun家族的其它成员相互作用。RBP2不与Fos和Jun家族的主要成员有相互作用。与c-Fos发生相互作用需要RBP1的RRM结构域和C端区域，c-Fos的bZIP区域与RBP1相互作用。RBP1和c-Jun可以竞争性与c-Fos结合。RBP1表达阻碍c-Fos/c-Jun异源二聚体的形成，因此我们认为，RBP1通过与c-Fos相互作用影响c-Fos/c-Jun二聚体的形成，从而抑制c-Fos介导的AP-1转录活性及其下游靶基因的表达。. 体外培养乳腺癌细胞系中，RBP1和RBP2均能够抑制细胞生长和迁移；体内裸鼠成瘤实验获得与体外一致的结果，RBP敲低造成肿瘤侵袭转移相关基因表达水平增加，肿瘤组织血管生成明显增加。在临床标本中，与癌旁相对正常的乳腺组织相比，RBP在乳腺癌组织中表达水平显著下降。综上所述，RBP可能在乳腺癌的发生发展中作为抑癌基因发挥重要作用。