组织因子靶向纳米粒介导光化学梗塞法治疗实体霍奇金淋巴瘤的实验研究

As TF is overexpressed on many cancer in solid tumors，newly formed tumor capillary blood vessels distribute many TF because they lack tight junctions between endothelial cells.EGFP-EGF1 protein-conjugated PEG-PLGA nanoparticles, recently developed in our laboratory,have shown thrombus targeting property by advantage of theTF-targeting property of EGFP-EGF1 fusion protein in vivo and in vitro. Rose bengal is a kind of photosensitizer.Upon exposure to illumination of appropriate wavelengths, which react with molecular oxygen in the surroundings, generating reactive oxygen, damaging the endothelium and inducing TF overexpression, finally thrombosis. However,it's half time is limited and is of toxicity. Rose will be encapsulated in the EGFP-EGF1 fusion protein conjugated PLGA nanoparticles and targeting TF on tumor vessels, and then the tumors will be illuminated at appropriate wavelength.Activated oxygen will damage the endothelium and induce more and more TF expression. So many TF will not only become the target of the nanoparticles, but also activate the blood coagulation and starve the tumor cells, which will be a promising choice for many other solid tumors.

与正常血管不同，很多实体瘤与血液恶性肿瘤的血管内皮均高表达组织因子（TF），其可作为针对肿瘤血管的特异性靶点。在前期研究中，本课题组根据FⅦ与TF特异性结合的空间结构，原核表达、制备了EGFP-EGF1融合蛋白，并将其与PEG-PLGA纳米粒共价结合制备了EGF1-EGFP-NP，体内外实验均证实其具有良好的TF靶向性和生物安全性。玫瑰红是一种光敏剂，静脉注射后可经局部冷光照射产生活性氧损伤血管内皮，导致TF释放和血栓形成。由于玫瑰红的体内分布缺乏特异性，本研究计划将玫瑰红包载在EGF1-EGFP-NP内部，静脉给药后通过TF靶向性聚集到高表达TF的肿瘤血管，然后采用冷光对肿瘤定位照射，局部产生的氧自由基可损伤肿瘤血管内皮导致TF进一步释放，既可提供靶标募集更多纳米粒子，又可持续产生TF激活凝血瀑布，导致目标部位血管梗塞，中断肿瘤细胞血液供应，可期望为实体肿瘤的治疗提供新的思路。

靶向抗血管治疗是很有潜力的抗肿瘤策略。光动力疗法(PDT)是新型的治疗治疗肿瘤的物理疗法，它采用适当波长的光诱导光敏剂产生分子氧，然后通过一系列作用诱导肿瘤的坏死和凋亡。而同时分子氧是诱导内皮细胞组织因子（TF）表达的重要分子。在本研究中，我们采用具有靶向至TF的EGFP-EGF1蛋白耦联载二代光敏剂HMME的PEG-PLAG纳米粒（ENP）系统，结合PDT疗法制造瀑布式TF靶向至肿瘤血管的效应，以达到更佳的破坏血管的效果。在体外，普通PEG-PLAG纳米粒(NP)和ENP分别与TNF-α诱导的脑微血管内皮细胞（BMECs）共孵育，流式细胞术和荧光显微镜检测BMECs对纳米粒的摄取，蛋白免疫印迹法和实时PCR检测PDT处理后的BMECs的TF表达水平。在体内，对荷瘤小鼠进行PDT治疗后，活体成像检测纳米粒在肿瘤区域的累积，取肿瘤切片免疫荧光染色显示TF表达和纳米粒分布。本研究中，体外实验显示ENP更有效的被TF高表达的血BMECs摄取，活体成像显示在荷瘤小鼠的肿瘤区域，ENP比 NP累积更明显，同时切片也显示在血管区域，ENP比NP累积更明显。PDT处理后，BCECs明显高表达TF，免疫荧光显示肿瘤血管表达TF更高，同时活体成像显示ENP介导的PDT组在肿瘤局部纳米粒累积较NP，ENP和NP介导的PDT组高，免疫荧光切片显示的血管纳米粒累积和活体成像一致。可靶向至TF的ENP联合PDT治疗，具有瀑布式靶向至肿瘤血管的能力，同时具有更精准的定位。