长链非编码RNA EMTRL在川崎病冠脉内皮间充质转化损伤机制中的研究

Kawasaki disease (KD), which is often associated with coronary artery lesions in children, is a most common childhood aquired cardiovascular disease. Recent studies have shown that Endothelial to mesenchymal transition (EndMT) may be a new mechanism of KD coronary artery damage. In the present study, we found a long-chain non-coding RNA (EMTRL), which is closely related to the pathogenesis and progression of KD. It may be through EMTRL / SRRM2 / UBC / PI3K / Akt signaling pathways to promote coronary artery EndMT, resulting in coronary artery endothelial injury. We have demonstrated that the expression of EndMT-related Vimentin and β-catenin mRNA and proteins in HCAEC were significantly up-regulated after lentivirus overexpressing EMTRL and target gene SRRM2.In this study, EMTRL transgenic mice, CRISPR / Cas9 knockout, and lentivirus overexpressing EMTRL gene in endothelial cells will be used to investigate the effects of EMTRL and its downstream target gene SRRM2 on vascular endothelial cell injury in KD model in vivo and in vitro. So as to provide a new target for the prevention and treatment of KD, will have a good medical value of transformation.

常累及儿童冠状动脉的川崎病（Kawasaki Disease， KD）是儿童最常见的获得性心血管疾病。最近研究表明，内皮间充质转化（Endothelial to mesenchymal transition，EndMT）可能是KD冠脉损害新的机制。本课题在前期工作基础上发现一个与KD发病和疾病进展密切相关的长链非编码RNA( EMTRL)，通过生物信息学及初步的功能验证发现EMTRL可能通过调控靶基因SRRM2，经EMTRL/SRRM2/UBC/PI3K/Akt通路促进了川崎病冠脉EndMT，从而导致冠脉内皮损伤。本项目将通过构建EMTRL转基因小鼠、CRISPR/Cas9敲除及慢病毒过表达内皮细胞中EMTRL基因等体内和体外的研究方法，探索EMTRL及其靶基因SRRM2及下游通路在KD模型中对血管内皮细胞损伤的作用，从而为KD的预防及治疗提供新的靶点，将具有良好的转化医学价值。

川崎病（KD）是儿童中最常见的获得性心脏病。最近的研究表明，长链非编码 RNA (lncRNA) 可以调节癌症转移中的内皮-间质转化 (EndMT)。然而，lncRNAs是否通过调节EndMT参与KD冠状动脉损伤尚未见报道。.LncRNA 微阵列 V3.0 用于分析急性 KD 患者、恢复期 KD 患者、发热儿童和健康对照的血清之间的人类 LncRNA。 Transwell迁移测定用于评估细胞迁移， EdU染色用于细胞增殖。 TUNEL法用于细胞凋亡。双荧光素酶报告基因检测用于评估 lncRNA 与候选靶基因之间的关系。使用白色念珠菌细胞壁提取物 (CAWS) 在小鼠中诱导的 KD 冠状动脉炎模型。.本研究发现，KD患儿血清中lncRNA EMRTL特异性升高，可进入人冠状动脉内皮细胞（HCAECs）。 EMRTL过表达强烈促进了HCAEC的迁移。值得注意的是，EMRTL 上调能够诱导 HCAEC EndMT，如形态变化和蛋白质 N-钙粘蛋白和波形蛋白水平增加、蛋白质 Claudin-1 水平降低等。双荧光素酶报告基因检测确定 SRRM2 是 EMTRL 的靶基因，SRRM2 可能通过泛素 C (UBC) 和 PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin 途径调节 EndMT 过程。 EMRTL调控EndMT的作用在KD小鼠模型中得到证实，因为含有EMRTL的重组AAV9病毒可显着加重冠状动脉炎症并增加 EndMT相关蛋白Vimentin的表达。.我们的研究结果表明KD儿童中的lncRNA EMTRL可以通过SRRM2/UBC/PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路促进与KD相关的EndMT过程，这可能参与冠状动脉损伤。