苦参碱对化疗药物诱导的神经病理性疼痛的保护作用及其分子机制研究

Matrine (MT) is an alkaloid extracted from Sophora alopecuroides L., which is a local herb in Ningxia region.Our previous studies have hinted the cues that MT possess benifecial effects on chemotherapy-induced neuropathic pain.This study intends to perform on mice models by intraperitoneal iniection of vincristine，via mechanical paw、cold plate、hot plate explore antinociceptive effect of matrine on vincristine-induced neuropathic pain model in mice. Application of inflammatory cytokines, Ras/Raf/ERK1/2 pathway, Caspases related tools drugs, immunofluorescence, ELIAS, Western blot analysis, RT-PCR and other technologies through activation of glial cells in the spinal cord dorsal horn, inflammatory cytokines, Ras, Raf, MEK1/2, ERK1/2, p38MAPK, caspases-3, PRAP indicators expression distribution and determination of analysis, to explore the relationship between MT neuropathic pain induced by chemotherapeutic drugs analgesic effect of the inflammatory system, to apply research MT treatment of neuropathic pain induced by chemotherapeutic drugs, provide the basis of theoretical and experimental basis for the Ningxia local resource advantages into economic advantages.

苦参碱（MT）是从宁夏特色药用植物苦豆子中提取的主要生物碱之一。本课题组前期研究结果提示MT对化疗药物诱导的神经病理性疼痛具有明显的镇痛效应。本研究拟采用小鼠腹腔注射长春新碱致神经病理性疼痛模型，利用行为药理学、组织学、生物化学、分子生物学等技术，从整体、细胞和分子水平，通过对机械缩足反射阈值、抬足次数等指标的检测，系统观察MT对化疗药物诱导的神经病理性疼痛的镇痛作用；通过对脊髓背角内IL-1β、IL-6、Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、Caspases-3、PRAP等指标的测定分析，探讨MT对化疗药物诱导的神经病理性疼痛的镇痛作用与炎症因子/Ras/ERK/caspases通路的关系，以期阐明其作用机制，为研究MT应用于化疗药物诱导的神经病理性疼痛的治疗，进一步探讨化疗药物所致神经病理性疼痛的发生机制，为对抗化疗药物诱导的神经病理性疼痛的药物发展提供新的策略。

苦参碱（Matrine, MT）是从宁夏特色药用豆科槐属植物苦豆子中分离提取的主要生物碱之一。本项目通过构建小鼠腹腔注射长春新碱致神经病理性疼痛模型，以脊髓背角和脊髓背根神经节（DRG）中的胶质细胞释放炎症因子介导的细胞损伤为主线，以Ras/Raf/ERK1/2和PI3K/Akt/mTOR信号通路为靶点，从整体、细胞和分子水平，探讨MT对小鼠长春新碱致神经病理性疼痛的镇痛作用及可能的分子机制。结果：(1)与模型组比较，MT 60mg/kg可提高小鼠机械缩足反射阈值（p<0.01），可延长小鼠热缩足反射潜伏期（p<0.01），可提高小鼠机械压痛阈值 （p<0.01），可减少冷抬足次数（p<0.01）。(2)与模型组比较，MT 60mg/kg可明显提高小鼠坐骨神经SNCV及CMAP（p<0.01）。(3)与模型组比较，MT 60mg/kg可明显恢复小鼠坐骨神经、背根神经节以及脊髓背角组织病理变化。(4)与模型组比较，MT 60mg/kg可明显降低小鼠脊髓背角GFAP免疫荧光强度（p<0.01）。 (5)与模型组比较，MT 60mg/kg可明显降低小鼠脊髓TNF-α, IL-6蛋白表达，升高IL-10蛋白表达（p<0.01）。(6)与模型组比较，MT 60mg/kg可明显降低小鼠脊髓p-ERK1/2免疫荧光强度(p<0.01)，同时可使小鼠脊髓Ras、p-c-Raf、p-ERK1/2蛋白含量及Ras、c-Raf、ERK1/2mRNA表达降低(p<0.01)。(7)与模型组比较，MT 60mg/kg可明显减少小鼠脊髓中FJB 染色的变性神经元。(8)与模型组比较，MT 60mg/kg可明显降低小鼠脊髓PI3K、p-mTOR、Bax等蛋白表达（p<0.01），而明显增加小鼠脊髓Bcl-2的蛋白表达（p<0.01）。结果显示MT对长春新碱诱导的神经病理性疼痛小鼠具有明显的，并且MT的镇痛作用与抑制脊髓Ras/Raf/ERK1/2和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。本项目首次对MT对长春新碱诱导的神经病理性疼痛的镇痛作用及相关机制进行了系统研究，填补了该药在神经及精神药理研究方面的空白。研究结果不但为充分开发和利用我区的优势原料药苦豆子生物碱类，将资源优势转化为经济优势，也为新型镇痛药物的开发提供了实验室基础研究数据，还为长春新碱在临床上的合理使用提供了新的策略。