基于微透析-液相-质谱在线联用技术的女贞子裂环环烯醚萜苷药动学与代谢物研究的新方法

女贞子含有的裂环环烯醚萜苷分子结构独特：大多分子中含有红景天苷，生理活性显著，具有抗氧化与抗肝纤维化等多重药理作用，应用前景十分广泛。微透析与色谱、光谱分析联用为全新技术，为体内药物分析开辟了新途径。而其在线联用（on-line）可从生物取样到色谱、光谱分析在线同步自动完成，避免了外源性干扰。本项目采用多通道阀切换、色谱工作站与阀控制联动，自行研制与构建微透析-液相色谱-质谱在线联用（MD-HPLC-MS on-line）平台，并应用这一新的分析技术与平台对女贞子裂环环烯醚萜苷的药代动力学规律、体内代谢过程及其影响因素进行全面探讨，对代谢产物及其活性等进行深入研究，将为该类新型活性化合物和资源丰富的植物有效部位的开发应用奠定扎实基础，并为中药药代动力学研究提供方法借鉴和技术平台。

完成主要研究内容，基本达到预期目标。.建立了女贞子裂环环烯醚萜总苷含量测定方法，通过碱水解将总苷各单体分子中共有的红景天苷水解下来，RP-HPLC法测定其量，通过计算得出裂环环烯醚萜总苷含量。总苷含量%=(水解后红景天苷含量-水解前红景天苷含量)%×694/305。.对女贞子中环烯醚萜总苷提取分离工艺进行了考察和优化。用4倍量的70%乙醇冷浸48 h后滤过，低温减压回收乙醇。大孔树脂AB-8吸附后，用50%乙醇洗脱，水浴挥干后得总苷提取物。纯度为66.67%。.以葛根素为模型药物，考察了药物自身浓度、灌注液pH值、丙二醇浓度、羟丙基-β-环糊精浓度对线性探针相对回收率的影响。自身浓度影响小。添加丙二醇降低回收率。注液pH值5.1、添加羟丙基-β-环糊精5%时显著提高回收率。.构建了微透析-高效液相色谱在线联用平台（MD-HPLC-MS on-line），主要部件包括：微透析设备、高效液相色谱仪、10孔自动进样阀,通过聚丙烯管路与生物兼容性粘合（Cyberbond）将微透析设备、10孔自动进样阀、HPLC系统连为一体。研制开发了联用平台控制软件，统一控制微透析取样、10孔切换阀、高效液相色谱仪或液相-质谱联用仪进样分析的同步切换操作。将10孔自动进样阀的VCOM软件和高效液相色谱工作站CLASS-VP软件同时装载到Windows XP中，实现了在线联动。.考察了自制微透析与高效液相在线联用仪器平台的技术性能。分别以在线联用和离线仪器进行分析，联用平台精密度、重现性、稳定性均优于离线装置。.应用MD-HPLC-MS on-line平台，以阿魏酸为原型药物，对线形探针体内外校正进行了验证。同时在线监测了大鼠给药葛根素凝胶后，皮下和血液中非结合型葛根素的浓度。皮肤Tmax：114 min，血液Tmax：823 min。皮肤T1/2：519min，血液T1/2：274min， 皮肤AUC tot：5005 ug•min•ml-1，血液AUC tot ：4326 ug•min•ml-1。.研究了红景天苷在大鼠肝微粒体中的代谢情况及选择性抑制剂对其代谢的影响，分别选择非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、奎尼丁、酮康唑、补骨脂素、异补骨脂素作为抑制剂，结果显示CYP1A2可能是参与红景天苷代谢的主要酶。非那西丁可抑制红景天苷代谢。