抑制Treg联合微波消融瘤内注射免疫微球的抗肝癌研究

我们既往研究发现，原位微波消融能够为诱导抗肝癌免疫反应提供有效抗原，但是不足以完全抑制肿瘤生长。免疫微环境理论提示调节性T细胞（Treg）严重影响了机体抗肿瘤免疫，抑制或清除Treg有可能改善免疫治疗效果。基于我们以往的工作基础，本研究拟采用小剂量环磷酰胺抑制肝癌组织中Treg的浸润，提高CD4+/CD8+效应T淋巴细胞的比例和杀伤活性，逆转免疫抑制微环境；在此基础之上采取微波消融杀死肿瘤细胞、减小瘤荷的同时，原位释放大量肿瘤抗原，为免疫活化提供效应原；同时，瘤内应用GM-CSF/IL-2免疫缓释微球诱导树突状细胞（DC）向肿瘤组织趋化，并促进DC对肿瘤抗原的提呈，诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）的产生，从而实现治疗和预防肿瘤复发的目的。通过检测体内外CTLs的杀瘤活性和肿瘤组织淋巴细胞浸润程度，阐明本治疗方案的抗肿瘤作用机制，为预防肝癌微波消融后的复发转移提供新的治疗策略。

我们既往研究发现，微波消融能够为诱导抗肝癌免疫反应提供有效抗原，但是不足以完全抑制肿瘤复发。本研究中，我们采用小剂量环磷酰胺(CTX)抑制荷瘤小鼠机体Treg的浸润，逆转免疫抑制微环境；在此基础之上采取微波消融杀死肿瘤细胞、减小瘤荷的同时，原位释放大量肿瘤抗原，为免疫活化提供效应原；同时，瘤内应用GM-CSF/IL-2免疫缓释微球诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）的产生，从而实现治疗和预防肿瘤复发的目的。实验分组如下：空白对照组、单纯消融组（MWA组）、消融联合细胞因子缓释微球组（ISV组）、消融联合Treg抑制组（MWA+Treg 抑制组）、消融联合细胞因子缓释微球及Treg抑制组（ISV+Treg抑制组）。结果提示，微波消融联合细胞因子缓释微球及Treg抑制组小鼠外周血Treg比例显著低于其它各组，脾脏中CD8+T细胞比例显著高于其它各组；ELISPOT检测INF-γ分泌较其它组显著升高；此外，该组小鼠生存期较其它组显著延长。以上结果表明，小剂量CTX能够有效地的抑制Treg细胞比例，增强机体免疫微环境，进而提高肝癌微波消融原位疫苗的抗肝癌疗效。在临床研究中，我们发现肝癌患者外周血Treg比例或者绝对计数不能很好的评判机体免疫状况，尚需测定Treg细胞功能的强弱。肝癌患者热消融治疗后无或抑制功能低下的Treg细胞比例升高，这有可能热消融治疗后机体免疫增强的机制之一。在未来的研究中，我们将继续对热消融联合免疫治疗的可行性和机制进行深入研究。