人CYP2B7基因克隆、表达及其应用研究

采用RT-PCR方法成功地克隆了CYP2B6cNDA，并将其片段亚克隆至哺乳动物高表达型载体之中，运用电转移技术将此重组质粒转染人羊膜FL系，中国仓鼠CHL细胞及V79细胞，并获得G418抗性细胞系。Northern印迹杂交证实三种转基因细胞系在mRNA水平上获昨高表达特性。CYP2B6标志酶EFCOD酶活性测定结果表明转基因细胞CHL-2B6可测到较高的活性，而对照母细胞不能测出，且质粒在细胞内稳定维持六个月以上。应用CHL-2B6对一组前致突变物/前致癌物进行双核细胞微核试验，同时以母细胞系CHL为对照，在不加S9的情况下，五种前致突变物，均能诱导CHL-2B6细胞的微核率显著增高并具有剂量反应关系。