PARP1在HBV截短型表面抗原影响肝癌干细胞干性维持中的作用及机制研究

HBV is an important factor leading to hepatocellular carcinoma (HCC), and liver cancer stem cells (LCSCs) play an important role in the occurrence of HCC. Our previous studies found that truncated HBsAg plays an important role in promoting HCC；HBV may affect the liver LCSCs stemness. Truncated HBsAg can up regulating the expression of PARP1, which plays an important role in the maintenance of stemness in HCC. It is worth to investigate whether or not truncated HBsAg promoting the occurrence HCC by impaction of the LCSCs stemness maintenance..Our study plan to comparing liver cancer stem cell self-renewal with expressing wild-type, truncated, substituted HBsAg and find out whether truncated HBsAg effect stemness maintenance; inhibiting PARP1 and observing the changes of LCSCs stemness maintenance promoted by truncated HBsAg, to explain the important role of PARP1 in the truncated HBsAg effecting stemness maintenance; through combining Flow-FISH with FISH immunofluorescence confocal technique, investigate the role of PARP1 in cell telomere maintenance in LCSCs, to elucidate the molecular mechanism of truncated HBsAg promoted PARP1 to effect of LCSCs stemness maintenance. This study will provide an important reference for the new specific targeted therapy of HBV related HCC.

HBV感染是导致肝癌的重要因素，肝癌干细胞在肝癌发生中具有重要作用。我们前期研究发现：截短型HBsAg在肝癌的发生中起重要作用；HBV可能影响肝癌干细胞干性；截短型HBsAg可促进在干性维持中起重要作用的因子PARP1的表达。截短型HBsAg是否通过影响肝癌干细胞干性维持导致肝癌发生及其机制值得深入研究。.本项目拟通过比较表达野生型、截短型、替换型HBsAg的肝癌干细胞干性维持的差异，研究截短型HBsAg对干性维持的影响；通过观察抑制PARP1，截短型HBsAg对肝癌干细胞干性维持影响的变化，研究PARP1在截短型HBsAg影响肝癌干细胞干性维持中的作用；通过Flow-FISH结合FISH免疫荧光共聚焦技术，研究PARP1在肝癌干细胞端粒维持中的作用，阐明截短型HBsAg通过PARP1影响肝癌干细胞干性维持的分子机制。本研究将为寻找新的HBV相关肝癌特异性靶向治疗提供重要参考依据。

HBV感染是导致肝癌的重要因素，肝癌干细胞在肝癌发生中具有重要作用。我们前期研究发现：截短型HBsAg在肝癌的发生中起重要作用；HBV可能影响肝癌干细胞干性；截短型HBsAg可促进在干性维持中起重要作用的因子PARP1的表达。截短型HBsAg是否通过影响肝癌干细胞干性维持导致肝癌发生及其机制值得深入研究。本项目建立了HBV阳性肝癌干细胞PDX模型3例及HBV阴性肝癌干细胞PDX模型1列。并利用微量样本多指标流式蛋白定量技术（CBA），发现HBV阳性肝癌干细胞中干性相关因子CD133，CD90，CD13，CD326较HBV阴性肝癌干细胞中干性相关因子表达量高。我们进一步构建了表达不同HBsAg的慢病毒表达体系，在HBV阴性肝癌干细胞中表达野生型，截短型，替换型HBsAg，发现截短型HBsAg可显著增强肝癌干细胞内四种干性标志物表达。在表达截短型HBsAg的肝癌干细胞FV026-sW172*中干扰PARP1表达，FV026-sW172*细胞中干性相关因子的表达下调，FV026-sW172*-siPARP1细胞荷瘤能力明显减弱。以PARP1抑制剂AG14361抑制FV026-sW172*细胞中PARP1表达，FV026-sW172*细胞中干性相关因子的表达下调。NCG鼠腹腔注射PARP抑制剂AG14361可显著抑制FV026-sW172*细胞荷瘤生长。比较表达不同HBsAg的HBV阴性肝癌干细胞FV026-Wt，FV026-sW172*，FV026-sW172L端粒长度，发现了解截短型HBsAg可激活肝癌干细胞端粒维持，PARP抑制剂可打破FV026-sW172*中端粒维持机制，诱发细胞凋亡。研究PARP1在肝癌干细胞端粒维持中的作用，阐明截短型HBsAg通过PARP1影响肝癌干细胞干性维持的分子机制。本研究将为寻找新的HBV相关肝癌特异性靶向治疗提供重要参考依据。