黄连素通过TLR7/TGF-β1信号途径防治辐射性肺损伤的分子机制研究

我们临床研究发现黄连素具有减轻辐射性肺损伤（RILI）的作用，但其具体机制尚不清楚。炎症反应和免疫失衡是RILI发生的主要机制之一，巨噬细胞在其中发挥重要作用。本研究根据前期临床研究结果和TLR7、TGF-β1与RILI密切相关的报道，提出黄连素可能通过抑制TLR7/TGF-β1信号通路，从而抑制RILI发生、发展的假说。为验证此假说，拟构建RILI的动物模型和体外炎性模型，通过基因敲除、基因过表达、RNA干扰等多种手段上调或下调关键基因的表达，应用组织病理学、RT-PCR、免疫组化和Western blot等多种技术，从正反两方面明确TLR7/TGF-β1信号通路在RILI发生、发展中的作用；同时观察黄连素对该信号通路的影响以及对RILI的防治作用。本研究将有助于进一步阐明RILI的发病机制及黄连素的作用机理，为RILI的防治拓宽新的思路。

辐射性肺损伤（RILI）是胸部肿瘤放射治疗的常见并发症，其具体发病机制尚不明了，且临床有效治疗措施少，疗效差。因此，深入研究RILI的发病机制，寻找安全、有效的药物具有重要的临床意义。本课题组临床研究发现黄连素具有减轻RILI的作用，我们提出并探讨TLR7/TGF-β1信号通路在RILI发生、发展中的作用；同时观察黄连素对该信号通路的影响及其对RILI的防治作用。在该研究中，分别构建了RILI的动物模型和体外炎性模型，进行基因敲除、基因过表达、及不同浓度黄连素干预研究：（1）在体内研究中，在不同时间点检测对比动物模型生命体征变化、肺组织巨噬细胞、病理组织学变化及TLR7/TGF-β1信号通路关键基因表达变化，观察TLR7/TGF-β1信号通路在RILI中的作用及黄连素的疗效；（2）体外分离肺泡巨噬细胞，建立炎性细胞模型，分别进行基因、药物干预研究，观察不同基因表达水平对TLR7/TGF-β1信号途径关键基因的影响及不同浓度黄连素对TLR7/TGF-β1信号途径的影响；（3）从体内外两方面研究沉默或高表达TLR7或TGF-β1基因，通过检测TLR7/TGF-β1信号途径中各关键分子的mRNA 及蛋白表达，从正反两方面验证RILI的发生机制及药物作用的分子机制。研究发现：(1) TLR7/TGF-β1信号传导通路在RILI的发生和发展中发挥重要作用；（2）黄连素通过抑制TLR7/TGF-β1通路介导的炎症反应，达到防治RILI的作用。本研究进一步阐明了RILI的发病机制，为RILI的临床诊治提供理论依据和作用靶点。