基于多重导向分离技术的猴耳环中PPAR-γ激动剂的快速发现及其抗血栓活性研究

Recently, PPAR-γ has been found to play an important role in the pathological genesis of cardiovascular diseases. Moreover, it is proven to be crucial to the prevention and treatment of cardiovascular diseases caused by inflammatory reaction of the binding of PPAR-γ and its receptor. In our previous study, extracts and compounds from Pithecellobium clypearia (Jack) Benth were found to have significant antithrombotic activity, besides, flavonoids and 3,3'-neolignans are found to be potential PPAR-γ receptor agonist by docking. We infer that the antithrombotic activity may be caused by the activation of PPAR-γ receptor. Based on docking theory, we plan to find the two types of compounds by the bioassay-guided and LC-MS methods(multi-guided isolation). Using docking technology to screen these isolated compounds to find potential PPAR-γ receptor agonist. Furthermore, the PPAR-γ receptor activation activity, anti-inflammatory activity and antithrombotic activity of these compounds, in order to discover the structure-activity relationship of these compounds. In addition, the mechanism and the binding sites of the PPAR-γ receptor will be discussed, which will make contribution to the screening of the leading compounds which can be further investigated regarding the pathways and the mechanisms of the antithrombotic activity.

PPAR-γ在多种心血管疾病中发挥作用，其作用机制与阻断NF-κB活化、抑制促炎细胞因子表达有关。本课题组前期研究发现抗炎中药猴耳环的提取物和其中的单体化合物均具有显著的抗血栓活性，并通过“分子对接”方法证明了其中的黄酮和3,3′-新木脂素是潜在的PPAR-γ受体的激动剂。为了更快速的获得大量新的PPAR-γ受体的激动剂，本课题组拟在“分子对接”为前期指导，采用“活性追踪”和“液质联用”的协同作用，多重导向分离猴耳环中的这两类化合物。结合计算机辅助药物设计筛选分离得到的化合物，筛选出与PPAR-γ受体结合能力较高的潜在激动剂后，进一步测试这些化合物的PPAR-γ受体激动活性、抗炎活性和抗血栓活性，优选出结构新颖的具有良好活性的先导化合物，并为进一步研究PPAR-γ激动剂在心血管疾病防治中的作用机制和通路提供思路。

猴耳环Pithecellobium clypearia (Jack) Benth为含羞草科猴耳环属植物，在2005年被收入中国药典。本项目采用活性导向分离的方法对猴耳环枝叶70%乙醇提取物进行了系统分离，共得到101个化合物，包括21个新化合物。通过“分子对接”技术进行PPAR-γ配体的虚拟筛选，根据筛选结果对得分较高的化合物依次进行了PPAR-γ激动活性、抗炎活性和抗血栓活性测试，以研究猴耳环中PPAR-γ激动剂的抗血栓的作用。但活性馏分中分离得到的单体化合物在相关的活性测试中并没有表现出较强的抗血栓活性。.参考文献，我们推测该植物中的化合物可能具有潜在的抗AD活性。我们对其进行了抑制Aβ1-42蛋白聚集活性测试，其中化合物42、43、48、57、59的抑制率均达到了80%以上，表现出了显著的抑制Aβ1-42蛋白聚集活性。在对抗双氧水诱导SH-SY5Y细胞死亡的保护实验中，化合物59表现出了最强的活性。进一步的药理结果表明，化合物59是通过减轻H2O2诱导的神经细胞凋亡和活性氧的产生从而发挥细胞保护作用的。此外，我们采用网络药理学将潜在的化合物和AD相关的蛋白相结合，建立了多参数相互作用网络，对猴耳环中化合物可能发挥抗AD作用的靶点和通路进行了预测。以上研究表明化合物59有望成为治疗阿尔兹海默病的先导化合物，有进一步开发的潜能，本研究也为猴耳环作为抗AD候选药物的开发和利用提供了理论基础。