反义RNA介导的DHRS4基因簇表观遗传学调控机制

为证实"反义转录本通过RNA介导的方式在表观遗传学水平调控DHRS4基因簇转录活性"的假设，本课题通过RNA干扰和过表达改变DHRS4反义RNA在细胞内的含量，然后检测DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1基因的表达以及启动子DNA甲基化、组蛋白甲基化和乙酰化修饰的变化，证实反义RNA在表观遗传学水平调控DHRS4基因簇的转录活性。在此基础上，进一步采用RNA免疫沉淀和染色质寡核酸亲和沉淀鉴定反义RNA在细胞核内结合的蛋白和DNA分子，详细探讨反义RNA表观遗传学调控基因转录的作用方式。本课题的研究成果有助于明确反义RNA对正义链基因表达的调节作用和表观遗传学水平的调控机制，并揭示参与DHRS4基因簇转录调控的可能因素，为今后进一步研究反义RNA和DHRS4基因簇在人体的功能和意义提供参考资料。

本课题在生物信息学分析不同物种DHRS4基因结构、RNA剪接亚型的基础上，通过RNAi、qPCR、RNA IP等实验证实人DHRS4反义转录本通过募集调控因子在表观遗传学水平调控正义DHRS4基因簇转录的假设，并提出DHRS4基因簇启动子本身的序列以及反义RNA可能参与了生物进化过程中拷贝基因的转录活性调控。课题还通过RNA pull down鉴定了DHRS4反义RNA在细胞内结合的蛋白，结果提示提示除在表观遗传学调控靶基因表达外，反义RNA也有可能在转录后等多个水平发挥基因表达的调控作用。结和课题有关反义RNA和选择性剪接的研究成果，以及相关的数据库资料分析，我们也提出CD45反义RNA可能参与调控正义CD45 RNA不同剪接亚型的表达，并与临床自身免疫病发病相关的假说，为下一个课题的申请和今后反义RNA结合临床疾病的研究拓开了一个方向。