抑制NFkB对胃食管反流破坏食管粘膜上皮屏障功能的干预以及机制研究

Gastroesophageal reflux disease (GERD) is the most commonly seen gastrointestinal disorder in the developed Western countries. With the development of economy in China, the prevalence of GERD is increasing yearly in Chinese population. GERD is also a key factor contributing to substantial impairment of patients' quality of life after radical resection of esophageal cancer. Acid inhibitor and anti-reflux surgery are two primary traditional intervention means on GERD, the disadvantages of which include the uncertainty of treatment and the emergence of a series of complications. We consider the strategy of targeting on the barrier function of esophageal epithelium against reflux is a more effective intervention means superior to traditional treatments.Our previous research has established a potential relationship between NFκB signaling pathway and the impairment of esophageal barrier function. In this study, we further propose an in vitro experiment and in vivo experiment focusing on the mechanism involving in the effect of NFkB on the attenuation of esophageal barrier function by reflux, and investigating on the specific effect of NFkB inhibition on esophageal barrier function against reflux, which lay down a foundation for future development of a novel and more effective GERD therapy as compared with traditional treatments.

胃食管反流病是一种常见的胃肠道紊乱性疾病，在西方发达国家具有较高的发病率。随着国民经济的发展以及人民生活水平的提高，我国普通人群胃食管反流病的发病率也具有逐年增高的趋势,并且胃食管反流病也是食管癌根治术后影响患者生活质量的重要因素之一。抑酸剂和抗反流手术是两种最主要的治疗胃食管反流病的传统干预手段，但其缺点是治疗效果不确定，尤其是对于顽固性胃食管反流患者，同时可能产生一系列的并发症。靶向食管粘膜上皮屏障功能的治疗是一种更加有效的，并优于传统治疗的干预手段。我们前期研究提出NFκB与胃食管反流食管粘膜上皮屏障损伤可能具有相关性，但具体伤机制还不清楚。本项目拟通过体外实验和动物实验，更加深入探讨NFκB在反流损伤食管粘膜上皮屏障功能机制中的作用，阐明NFκB抑制对胃食管反流食管粘膜上皮屏障功能的治疗作用，为寻求一种新的、更加有效的治疗胃食管反流病的手段提供理论和实验依据。

胃食管反流病是一种常见的胃肠道紊乱性疾病，我国普通人群胃食管反流的发病率具有增高的趋势。胃食管反流病也是食管癌术后最常见的并发症之一。目前的对胃食管反流病的干预方式主要包括改变生活习惯，药物治疗以及抗反流手术治疗，但效果都不确定。对胃食管反流发病机制的研究以及探索出一种行之有效的治疗策略是当今研究的热点之一，现今还没有一种特异针对胃食管反流相关的食管粘膜上皮屏障损伤的治疗策略，因此我们的研究无论在κ转化医学或者在创新性方面都具有重要价值。本研究选择一类永生化人食管鳞状上皮细胞株HET1A细胞作为研究细胞。通过体外培养发现单纯HET1A细胞难以形成有效的细胞间贴附以及细胞间连接。通过对相关文献的查阅发现榭皮素(Quercetin)以及特丁基对苯二酚(tBHQ)可以提高不同类型上皮细胞的完整性以及增强上皮防御功能。分别将不同浓度Quercetin以及tBHQ加入HET1A细胞株中，发现100μmol/L Quercetin 处理24小时的HET1A细胞在细胞数量是最多的；在相差显微镜下观察可以形成有效的细胞间贴合以及细胞间连接；对细胞跨上皮电阻抗以及上皮对小分子物质通透性分析显示上皮屏障功能相对更加完善；免疫组化显示除了Cldn1表达没有明显改变，Cldn4、Occludin以及ZO-1的表达水平是明显增加的。从以上几个方面可以证明Quercetin 100μmol/L处理24小时的HET1A细胞是最适合做兴奋以及抑制实验的研究细胞。本研究目前所获得的数据可为接下来的体外研究NFκB兴奋以及抑制实验打下坚实的基础以及做好铺垫。