恩蚜小蜂属（膜翅目：蚜小蜂科）DNA条形码和隐存多样性的研究

恩蚜小蜂属（膜翅目：蚜小蜂科）是农林害虫粉虱、介壳虫等的重要天敌，该属个体微小，数量众多，是蚜小蜂科中种类鉴定和系统分类比较困难的一个属。DNA条形编码是通过分析标准目的基因的DNA序列进行物种鉴定的新技术。它简便、快速、准确，是传统形态分类的有力补充。本项目以恩蚜小蜂为研究对象，进行PCR扩增、测序；通过基因组的分析，筛选广泛适用于恩蚜小蜂种类鉴定的DNA条形码标准基因，研究标准基因的变异规律，优化标准基因的设计，揭示恩蚜小蜂属的隐存多样性，最终建立一套传统形态分类和DNA条形码相结合的快速、准确的鉴定技术。本项目进一步补充和深化了传统分类研究，研究结果将填补我国恩蚜小蜂属DNA条形码研究的空白，充实世界蚜小蜂DNA 条形码数据库，从而促进恩蚜小蜂属的系统分类及其在生物防治中的应用。DNA条形码基因序列的获得还将为系统发育树的构建提供必要的遗传信息，从而推动恩蚜小蜂分子系统发育的研究。

本项目在福建、海南、云南、吉林、广东、浙江、北京等地采集恩蚜小蜂属19种，包括2新种Encarsia floralis和Encarsia maculiformis，其中Encarsia plana的雄性个体首次被发现并描述。采用不破坏标本的方法提取DNA，PCR扩增产物并对核糖体28S rDNA和线粒体COⅠ基因序列进行测序，以黄蚜小蜂属的代表种为外群，基于28SrDNA、COI及合并数据集28SrDNA&COI，采用相邻连接法、最小进化法、最大似然法构建恩蚜小蜂属的系统发育树。结果如下：(1)设计出恩蚜小蜂属28SrDNA和COI的特异性引物各1对。28S序列的引物是：28Sf 5'-AGTACCGTGAGGGAAAGTTG-3'；28SR 5'-TTGGTCCGTGTTTCAAGACGG-3'；COI 序列的引物是：F(bp38) 5'-AAGAATGAGATCTAGAAGGATAAT-3'；R(碱bp746) 5'-GGAATTAT AGGAATAATTTATGC -3'；(2) 28SrDNA序列的A+T碱基含量为43.5%，低于C+G碱基含量(56.5%)。COI序列的A+T碱基含量为77.2％，高于C+G基含量（22.8％）。经分析碱基替换饱和性和P距离-R的关系，可知28SrDNA和COI基因序列的系统发育信号均较好；（3）28S&COI数据集的A+T的碱基含量为56.1％，C+G的碱基含量为43.9％。与28SrDNA序列的碱基替换情况相似，且28S&COI数据集的保守性也较强。28SrDNA在28SrDNA&COI合并数据集中起主要作用，因此认为28S基因更能够提供有效的系统发育信息；（4）得出恩蚜小蜂属4个确定的种团：aurantii种团（aurantii（lutea +（perniciosi+smithi）），strenua种团（sophia +（bimaculata + protransvena）），inaron种团（inaron +（azimi）），luteola种团(luteola + meritoria)；（5）运用特征法对DNA条形码进行分析，DNA条形码在属以下的鉴定水平上显示出有效性。28SrDNA和COI基因序列均可用于种类鉴定，且所有种类均在28SrDNA和COI基因序列的某一特定位置表现出独特的碱基。