MicroRNA-10a调控神经胶质瘤生长及转移的机制研究

As an post-transcriptional regulation factor,miRNAs play important role in the development and metastasis of tumors.In our previous research we found that miR-10a expressed highly in glioma tissues than that in adjacent noncancerous tissues, and we firstly found that miR-10a could promote the growth and metastatic ability of glioma cells in vitro.Then gene expression array and bioinformation were used and 12 candidate targets of miR-10a was selected,including E2F transcription factor 7(E2F7), Eph receptor A8(EphA8),et al.The object of this study is to explore the direct target of miR-10a and its possible mechanism by EGFP reporter assay,real-time RT-PCR and Western blot analysis, and to analyze the effects of the targets on the malignant phenotype of glioma cells by RNA interference technique.These findings may provide experimental and theoratical evidence to understand the development of glioma and to develop the early diagnosis reagents and effective therapy drugs of glioma.

微小RNA（miRNA）作为一种转录后调节因子，在肿瘤的发生发展及转移过程中发挥重要作用。本项目前期研究发现miR-10a在神经胶质瘤组织中较癌旁组织相比，表达水平明显增高，并首次发现miR-10a可在体外促进神经胶质瘤细胞生长及转移能力，并应用mRNA表达谱芯片技术结合生物信息学分析，筛选得到了miR-10a的12个可能靶基因，包括与肿瘤直接相关的E2F转录因子7（E2F7），酪氨酸激酶受体A8（EphA8）等。本项目拟通过GFP融合报告载体技术结合实时定量PCR和Western印迹的方法，系统分析miR-10a作用的直接靶基因及其可能作用方式，并利用RNA干扰及过表达技术深入研究这些靶基因对神经胶质瘤恶性表型的影响，以期阐明miR-10a促进胶质瘤发生发展的分子机制，为理解神经胶质瘤发生和开发胶质瘤早期诊断试剂及有效治疗药物提供实验线索和理论依据。

本项目在前期发现miR-10a在神经胶质瘤组织中高表达的基础上，旨在进一步探讨miR-10a对胶质瘤细胞恶性表型的影响，包括细胞活性、细胞增殖、细胞迁移及侵袭能力。并通过生物信息学分析筛选miR-10a的靶基因，而后利用GFP融合报告载体技术结合实时定量PCR及Western blot方法进一步验证miR-10a对其靶基因的调控方式，并利用细胞表型实验确定靶基因对细胞恶性表型的影响，以阐明miR-10a作用于神经胶质瘤的分子机制。. 通过研究我们证实与癌旁组织相比，miR-10a在胶质瘤组织中的表达水平明显增高，且在高分级瘤组织中的表达水平与低分级组织相比也明显增高。细胞表型实验结果显示，miR-10a在体外可增强胶质瘤细胞U251及U87的细胞活性、增殖、迁移及侵袭能力。荷瘤鼠模型体内实验证实miR-10a在体内可促进胶质瘤的增殖。通过生物信息学分析结合实时定量PCR及Western blot方法，最终确立EphA8为miR-10a的靶基因。接下来通过RNA干扰技术证实敲降EphA8的表达同样可增强U251及U87的细胞活性、增殖、迁移及侵袭能力。挽救实验结果显示过表达EphA8可抵消miR-10a对胶质瘤细胞恶性表型的影响,进一步证实EphA8是miR-10a的直接作用靶基因。最后，通过检测miR-10a及EphA8的表达水平变化时上皮及间皮细胞表型的分子标志物的蛋白水平变化证明EMT参与了miR-10a及EphA8对胶质瘤细胞迁移及侵袭的调控过程。同样，敲降miR-10a及过表达EphA8均可使Wnt信号通路下游的相关蛋白Bcl-2、c-myc及c-Jun的表达水平增高，证实miR-10a及EphA8通过调控Wnt信号通路而影响胶质瘤细胞的增殖能力。. 本研究确立了miR-10a对胶质瘤发生发展的影响及其分子机制，为理解神经胶质瘤的发生和开发胶质瘤早期诊断试剂及有效治疗药物提供实验线索和理论依据。