微生物来源新型抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用

本项目拟以从微生物代谢产物中寻找新型抗结核药物，将以结核分枝杆菌生长所必须的，且与真核细胞中相关酶有着巨大差异的苯丙氨酰-tRNA合成酶（PheRS）作为药物筛选靶点。利用结核分枝杆菌H37Rv的基因组序列信息，设计引物，用PCR方法扩增其pheRS基因（包括pheS和pheT基因），将得到的两个基因连接到表达载体，通过诱导使这两个基因在大肠杆菌BL21或链霉菌表达系统中中同时高效表达。使用纯化的结核分枝杆菌PheRS全酶，采用液闪记数法，建立酶水平的高通量药物筛选模型。从放线菌、真菌，海洋微生物以及难分离培养微生物的代谢产物以及纯品化合物中，以能够快速生长而又与结核分支杆菌近缘的耻垢分枝杆菌为检定菌，得到初筛阳性菌株或阳性化合物，然后再用酶水平的复筛模型筛选靶向结核分支杆菌PheRS的新型抗菌化合物。验证其抗结核分支杆菌毒株的活性，获得1至2种有自主知识产权的抗结核的先导化合物。