抗骨肉瘤单链抗体免疫毒素的构建及杀伤和抑瘤研究

从分泌抗人骨肉瘤单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株中抽提出mRNA，在反转录酶催化下合成cDNA并以此为模板，用PCR分别扩增出抗体可变区基因重、轻链，再用肽段连接，构建出抗骨肉瘤单链抗体基因，通过与绿脓杆菌外毒素PE40基因融合构建成抗骨肉瘤单链抗体免疫毒素OS-ScFv-PE40进一步在大肠杆菌中表达。筛选鉴定，并用此对人骨肉瘤细胞株HOS进行了体外杀伤和抑瘤实验，抑瘤率达25-30%。用免疫组化ABC法检测了癌基因蛋白p21，p185、EGFR及LN、IV胶原在骨肉瘤组织中的表达、发现骨肉瘤中存在多种癌基因的异常，同时证实细胞外基质的破坏在骨肉瘤侵袭和转移中的重要作用。为深入研究骨肉瘤的靶向治疗和癌基因监控奠定了良好的基础。