NLRP3炎症小体在HEV感染致肝脏细胞焦亡过程中的作用机制

Hepatitis e virus (HEV), which is a pivotal zoonotic pathogen, can infect both human beings and domestic animals. NLRP3 inflammasome plays key roles in sensing pathogens and regulating immune responses of the body system. However, whether it participates in liver injury in HEV infection has not been reported to date. In our project, Mongolian gerbils are employed and infected wih HEV. NLRP3 inflammasome is supposed to be activated in this animal model. Primary hepatocytes or hepatic Kupffer cells are postulated as target cells and are isolated in vitro. NLRP3 inflammasome activation and cell pyroptosis are examined in HEV-infected cells using a NLRP3 inhibitor. Cytokines secreted after NLRP3 inflammasome activation are detected by ELISA or Luminex assays. In summary, we study pathogenesis of NLRP3 inflammasome in HEV-induced liver cell pyroptosis in both in vivo and in vitro experiments and in both gene and protein levels. It not only enriches and improves the pathogenic mechanisms in HEV-induced liver injury, but also provides a rationale to target NLRP3 as a therapeutic point in HEV infection.

戊型肝炎病毒（hepatitis e virus, HEV）可感染人和多种动物，是一种重要的人畜共患病原。NLRP3炎症小体在感知病原微生物入侵，调节机体免疫应答方面发挥了重要作用，但其是否参与HEV致肝损伤的过程尚未见报道。本研究拟选用长爪沙鼠为实验对象，通过HEV感染实验，明确感染沙鼠肝脏NLRP3炎症小体信号通路的激活情况，并建立HEV感染沙鼠原代肝脏细胞模型，通过抑制NLRP3的表达，研究该信号通路在HEV致病过程中的作用机制，以及其在HEV感染引起的肝脏细胞焦亡过程中的作用。并对下游致炎因子进行检测，进一步明确HEV致沙鼠肝损伤的分子机制。该项目拟通过在体和离体实验，在基因和蛋白水平上，系统研究NLRP3炎症小体信号通路在HEV感染沙鼠引起肝脏细胞焦亡过程中的作用机制，不仅可以丰富和完善HEV致病机理，也为寻找有效的药物治疗靶点提供一定的科学依据。

戊型肝炎病毒（hepatitis e virus, HEV）可感染人和多种动物，是一种重要的人畜共患病原。世界各地均有戊型肝炎爆发的报道，世界卫生组织预测全球每年大约有2000万人感染HEV，约有330万人表现出临床症状，其中2015年由于感染HEV造成的死亡病例大约4.4万例，占病毒性肝炎死亡人数的3.3%。中国也是HEV高流行国家，时常有HEV聚集性感染的报道，且近年来人群HEV感染率呈上升趋势。NLRP3炎症小体在感知病原微生物入侵，调节机体免疫应答方面发挥了重要作用，但其是否参与HEV致肝损伤的过程尚未见报道。本研究选用长爪沙鼠为实验对象，通过HEV感染实验，证实HEV感染可引起肝脏NLRP3炎症小体信号通路激活，并进一步引起肝脏中焦亡相关蛋白GSDMD表达量升高。同时通过体外实验，建立了HEV感染沙鼠原代肝脏细胞模型，在体外进一步证实HEV感染后NLRP3信号通路以及焦亡相关蛋白GSDMD被激活，并且可诱导下游炎症细胞因子如IL-1β等的升高，这可能是HEV感染引起肝脏损伤的机制之一。本研究进一步利用NLRP3特异性抑制剂MCC950阻断NLRP3信号通路激活，结果表明，MCC950组感染细胞所表达的促炎因子IL-1β、IL-18和TGFβ均显著下降。以上结果说明NLRP3信号通路及其介导的焦亡信号通路参与了HEV感染致肝脏损伤的过程。本项目系统研究了NLRP3炎症小体信号通路及其介导的焦亡信号通路在HEV感染沙鼠引起肝脏损伤中的作用，为丰富和完善HEV致病机制提供了科学依据，同时也为临床寻找有效的抗HEV药物以及戊型肝炎治疗靶点提供新的依据。