TCDCA对AA大鼠成纤维样滑膜细胞PGE2/cAMP信号转导通路的影响

As important inflammatory mediators, PGE2 involved in the pathological process of rheumatoid arthritis ( RA ) by coupling with the cell membrane EP receptor and then activating the G protein-coupled signaling pathway. Our previous studies found that taurochenodeoxycholic acid (TCDCA) had a significant role in the treatment of AA rats, but the mechanism of TCDCA treatment of AA is not entirely clear. For this reason, the mRNA and protein expression of PGE2、cAMP、G proteins, pCREB Ser133 protein, COX-2, the EP2 and EP4 will be detected in the AA rats FSL by ELISA, Fura2-/AM, fluorescence quantitative PCR method, Western blotting and other methods. Aim to investigate the effect of TCDCA on the G protein-cAMP-CREB-COX-2 signaling pathway activated by EP2 or EP4 receptor in AA rats FSL, the molecular regulation mechanism of TCDCA anti-inflammatory and immune function will be revealed in depth. The experimental basis for studying the new targets of anti-inflammatory immunomodulatory drugs will be provided.

前列腺素E2（PGE2）作为一种重要的炎症介质，通过与细胞膜表面的EP受体偶联，进而激活G蛋白偶联信号转导通路，参与类风湿性关节炎（RA）的病理过程。我们的前期研究发现，牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）对AA大鼠具有显著的治疗作用，而TCDCA治疗AA的作用机理目前尚不完全清楚。为此，本研究拟采用ELISA、Fura-2/AM荧光法、荧光定量PCR、Western bloting等方法，检测AA大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）内PGE2、cAMP、[Ca2+]i 、G蛋白、pCREB Ser133蛋白、COX-2 和EP2、EP4受体mRNA及蛋白等表达。旨在探讨TCDCA对AA大鼠FLS EP2或EP4受体激活G蛋白-cAMP-CREB-COX-2信号通路的影响，深入揭示TCDCA抗炎免疫作用的分子调控机理，为研究抗炎免疫调节药物新的作用靶点提供实验基础。

为探讨牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic acid ,TCDCA）的抗炎作用的分子机制，寻找TCDCA抗佐剂性关节炎（Adjuvant Arthritis，AA）作用的药理学基础，本课题以AA大鼠成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocytes，FLSs）为研究工具，研究TCDCA对AA大鼠成纤维样滑膜细胞PGE2/cAMP信号转导通路的影响。.主要研究内容包括：通过ELISA法检测TCDCA作用于AA大鼠FLSs的量效关系曲线；采用实时荧光定量PCR技术检测AA大鼠FLSs内EP2/EP4、COX-2、mPGES基因的表达；采用Western blot技术检测AA大鼠FLSs内EP2/EP4、Gas/Gai、COX-2、pCREB Ser133蛋白的表达；采用ELIAS法检测FLSs内cAMP、PGE2的含量。.结果表明：TCDCA能够降低PGE2刺激后AA大鼠FLSs内cAMP的含量，且存在时间、剂量依赖性关系；与Control组比较，EP2/EP4受体激动剂和PDE4抑制剂能显著的升高AA大鼠FLSs内cAMP含量，而EP2/EP4受体阻断剂、G蛋白阻断剂及AC抑制剂则显著的降低EP2/EP4受体激动剂处理后AA大鼠FLSs内cAMP含量；与PDE4抑制剂+ EP2/EP4受体激动剂组比较，TCDCA能显著的降低AA大鼠FLSs内cAMP含量。与PGE2组比较，TCDCA均可显著抑制PGE2诱导的AA大鼠FLSs内EP2、EP4 mRNA及蛋白的表达量；与Control组比较，PGE2可降低AA大鼠FLSs内Gs蛋白的表达量，升高Gi蛋白的表达量，与PGE2组比较，TCDCA可显著促进PGE2诱导的AA大鼠FLSs内Gs蛋白的表达量，而抑制Gi蛋白的表达量；TCDCA可显著的降低H89诱导的AA大鼠FLSs内COX-2 mRNA及Indom诱导的AA大鼠FLSs内mPGES mRNA的表达量；但对COX-2、pCREB Ser133蛋白表达无显著性影响。TCDCA可降低AA大鼠FLSs内[Ca2+]i 浓度。TCDCA可显著的降低IL-1β诱导的FLSs上清液中PGE2含量。该研究结果为揭示TCDCA抗炎作用的分子机制提供了实验依据。