脂联素对类风湿成纤维样滑膜细胞增殖及侵袭能力的调控

类风湿关节炎（RA）以慢性侵袭性滑膜炎为特征，脂肪因子特别是脂联素在RA滑膜炎过程中扮演着重要角色，但其机制尚不清楚。体外研究提示：脂联素能促进成纤维样滑膜细胞（FLS）上VEGF以及MMPs表达而促进滑膜炎，但动物实验研究提示脂联素具有抗炎作用，故其在RA滑膜炎中的作用及机制有待在模拟人体内条件下进一步明确和验证。本课题组在国内首次建立了荷人RA滑膜软骨SCID小鼠（SCID-HuRAg）模型体系，并发现MMPs及VEGF表达受到CD147的调控。推测：关节局部可能存在脂联素-CD147相互作用而促进滑膜炎症及软骨侵蚀。本研究旨在①利用SCID-HuRAg模型研究脂联素对FLS增殖及侵袭能力的影响；②明确脂联素对FLS上CD147、VEGF及MMPs表达及功能的影响；③进一步探索脂联素在调控FLS增殖和侵袭能力的信号途径。从CD147角度为阐明脂肪因子在RA中多面效应及机制奠定基础。

类风湿关节炎以滑膜成纤维细胞的增生以及骨和软骨不同程度的侵蚀为主要特征。成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)过度增殖，凋亡和衰老降低，产生多种炎症介质和促血管生成因子，直接导致软骨的毁损，在RA的发展中起核心的作用。脂联素是主要由分化的脂肪细胞分泌的蛋白激素，脂联素在RA-FLS细胞中的炎症反应和在RA的发生发展中的作用存在争议，相关的机制需要进一步地澄清。本研究通过利用SCID-HuRAg模型研究脂联素对FLS增殖及侵袭能力的影响,明确脂联素对FLS上CD147、VEGF及MMPs表达及功能的影响,探索脂联素在调控FLS增殖和侵袭能力的信号途径,取得以下主要重要结果及关键数据：1. 成功建立稳定的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞培养体系，确定最佳诱导条件；2. 在建立RA患者FLS原代培养研究体系基础上研究脂联素对FLS分化及功能影响的条件;3. 证明外源性脂联素可以可促进FLS细胞增殖及迁移能力；4. 通过阻断实验确定了脂联素抗体、CD147拮抗剂可抑制上述直接接触共培养体系中成纤维滑膜细胞的增殖和侵袭能力；5. 在成功建立了脂联素对类风湿成纤维样滑膜细胞增殖及侵袭能力的调控的研究体系的基础上，进一步研究脂联素及其受体对RA-FLS所产生细胞因子、基质金属蛋白酶等的影响及调控：6. 证明了脂联素促进RA-FLS细胞的增殖、侵入和迁移，诱导细胞中VEGF，MMP-2、3和MMP-9以及TNFα、IL-6等炎性因子的表达，7. 脂联素和脂联素受体(AdipoR1/AdipoR2)和结合蛋白T-cadherin介导脂联素的作用，AMPK、p38、ERK1/2、JNK等可能参与该过程。总之，本研究建立了脂联素对类风湿成纤维样滑膜细胞增殖及侵袭能力的调控的研究体系，研究并获得脂联素促进FLS增殖及侵袭分化的最佳条件；证明外源性脂联素能够促进成纤维滑膜细胞的增殖，脂联素抗体及CD147抗体等拮抗剂可抑制该过程，通过体外及体内实验明确了脂联素能够促进成纤维滑膜细胞的侵袭及增殖能力，导致SCID-HuRA模型中软骨的侵蚀及破坏。提示脂联素在自身免疫性炎症性疾病中的重要作用，为进一步明确脂联素作为RA治疗新的治疗靶点奠定了基础。