改良的蛋白诱导多能性干细胞的建立及其向功能性神经细胞的分化

中枢神经创伤是一类重大伤病和严重的社会医学问题，促进患者神经再生是当今研究的热点和难点。iPS细胞技术为中枢神经创伤患者的神经再生移植治疗提供了一种新途径，其优点是不存在伦理学争议和移植免疫排斥。目前，通过重编程因子的重组蛋白直接诱导生成iPS细胞的技术是公认最安全的技术，完全避免了对iPS细胞基因组DNA修饰的可能，几乎不存在致瘤的风险。但是，该种技术制备iPS细胞的效率很低，离临床应用尚有距离，而且，此种技术所得iPS细胞是否能够分化成有功能的神经细胞，目前尚无研究报道。因此，本课题拟通过优化重组蛋白从宿主细胞内体逃脱的效率，增加重组蛋白进入细胞核的数量，改善重编程效率，缩短iPS细胞制备周期；同时，探讨本法所得iPS细胞是否能定向分化成有功能的神经细胞，如运动神经元，研究其分化的分子机制，为中枢神经创伤的细胞替代治疗提供新的理论参考。

本课题是一个小额探索性项目，主要目标是通过使用4种重编程因子Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4的重组蛋白直接诱导脂肪干细胞生成iPS细胞，然后将此细胞分化得到神经干细胞。本课题经过一年时间的探索，通过基因工程手段，我们顺利获得上述4种重编程因子的重组蛋白，将其诱导大鼠的脂肪干细胞，我们获得ES样细胞，经鉴定确定为iPS细胞。之后将iPS细胞分化得到神经干细胞，并进行鉴定。