基于心肌保护蛋白及离子通道的参附药对"扶阳固脱"改善心衰的配伍机制研究

Radix Ginseng-Radix Aconiti Lateralis drug pair is a representative group of "strengthening yang and preventing exhaustion"in improving heart failure (HF). However, the effective components and compatibility of this multi-compound and multi-target drug pair in improving HF have not been elucidated comprehensively and systematically. Based on our previous basic research and the holistic theory of Traditional Cinese Medicne, the present study attempted to optimize the compatibility of the drug pair by comparing the pharmacological activities of Radix Ginseng, Radix Aconiti Lateralis and Radix Ginseng-Radix Aconiti Lateralis drug pair in treatting yang-deficiency in an HF animal model. We also plan to investigate the effective components combined with the results of PK/PD, metabolisms from Radix Ginseng-Radix Aconiti Lateralis drug pair and endogenous components (T3, T4, ALD, BNP ) from rats. Finally, we shall measure the myocardical protective proteins (HSP70, GRP78), ion channel currents (ICa-L ,Ito, INa/Ca,IK-ATP) and miRNAs by RT- PCR, Western Blot and patch clamp technology in an attemtp to clarify the mechanism of the multi-path and multi-target of Radix Ginseng-Radix Aconiti Lateralis drug pair in "strengthening yang and preventing exhaustion" improving HF .

人参附子药对（参附药对）"扶阳固脱"是治疗阳气虚衰型心力衰竭（HF）常用且有效的药对，但有关参附药对多成分、多靶点改善心衰的药效物质基础和配伍机制尚未系统阐明。本项目结合前期研究基础，在"辨证论治"与"整体观念"中医理论指导下，以人参、附子及参附药对为研究对象，建立阳气虚衰大鼠HF模型，通过药效学评价，确定参附药对最佳配比；采用组合微透析技术，进行PK/PD研究，作代谢物成分群及T3、T4、ALD、BNP等内源性物质检测分析，揭示参附药对配伍的药效物质基础；应用全细胞膜片钳及RT-PCR等分子生物学技术，以心肌HSP70、GRP78等保护性蛋白和心室肌细胞ICa-L、Ito、INa/Ca、IK-ATP等离子通道电流及microRNAs的基因表达调控为指标，从整体、细胞、分子、基因水平阐明参附药对改善心衰的调控作用与机制。从而揭示参附药对"扶阳固脱"多途径、多靶点改善心衰的配伍机制。

人参附子药对（参附药对）是治疗阳气虚衰型心力衰竭常用有效的药对。本项目在“辨证论治”与“整体观念”中医理论指导下，从整体、细胞、分子、基因水平阐明参附药对改善心衰的调控作用与机制，揭示参附药对“扶阳固脱”多途径、多靶点改善心衰的配伍机制。. 建立了阳气虚衰HF大鼠模型及其中医证候诊断标准，以阳虚表现为主症，以“心”的症状为次证，即体现了阳虚症候，又体现了脏腑定位。用大鼠体温，呼吸频率和心率等可量化的指标来表示主症症状更为客观和科学。. 根据各经典古籍和名医方确定参附配比研究中分组剂量，采用HPLC法测定不同配比参附药对浸膏中指标性成分人参皂苷Rg1、Re、Rb1以及新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量，为不同配比参附药对复方提取的质量控制提供科学依据。. 通过药效学研究探讨红参、附子单味药和不同配比药对的药理作用研究，通观察阳气虚衰HF大鼠血流动力学、心肌组织病理学及血清学指标等，得到参附药对的最佳配比为1:10组，为相关中药药对配伍规律及方剂物质基础研究的方法提供借鉴。参附药对1:10组，以附子为君药，辅以红参配伍，即提高了人参皂苷的溶出度，又降低了附子中乌头碱类成分的含量，起到了中药复方增效减毒的目的，更有效增强了其改善阳气虚衰型心衰的效果，故疗效明显优于其余配比参附药对及各拆方组。. 初步探讨了参附注射液改善心衰的作用机制。参附注射液可以改善心衰大鼠心功能指标，改善心衰大鼠心肌细胞超微结构，改善代偿性心肌肥大，而且使得慢性心衰大鼠的心脏舒张收缩功能得到了明显的恢复与改善。参附注射液可以增大正常大鼠和心衰大鼠心室肌细胞膜上L-型钙通道的电流密度，增强CICR的过程，增加肌浆网钙瞬变幅度和肌浆网钙储量，增强心肌收缩力，促进心衰大鼠心功能的恢复。. 本项目也对参附注射液改善心肌肥大大鼠心功能的作用机制进行了探讨，发现心肌肥大的大鼠存在23种miRNA表达改变。参附注射液（SFI）可以通过维持或上调miRNA-181d-5p，降低miRNA-181d-5p靶蛋白MHC的表达对PE诱导的心肌细胞肥大产生保护作用。