IDO酶阻断TGF-β/Smad信号通路抗纤维化对肝移植慢性排斥的双重保护作用

慢性排斥反应(CR)是导致移植肝功能丧失的重要原因，一旦发生将不可逆，目前尚无有效治疗手段。其机制除免疫损伤外，TGF-β/Smad信号通路介导的促纤维化非免疫损伤因素越来越受到重视。长期应用CNIs类药物导致CR就与其诱导活性氧激活该通路有关。新发现吲哚胺双加氧酶（IDO）可阻断TGF-β的促纤维化过程，但其作用靶点和机制不详。我们前期研究发现IDO酶具有很强的抗肝移植免疫损伤和抗氧化能力，因此推测IDO酶可通过抗免疫损伤和减少活性氧生成从而阻断TGF-β/Smad介导的非免疫损伤两方面来保护慢排。本课题将以小剂量环孢素大鼠肝移植慢排模型，弹性超声检测肝纤维化，"微透析"监测IDO酶活性，研究①TGF-β/Smad在慢排中的作用；②IDO酶阻断TGF-β/Smad信号通路的靶点；③"睡美人"转座子上调IDO基因表达抗免疫和非免疫损伤对慢排的双重保护机制。这将有助于开辟肝移植慢排治疗新途。

目的：建立大鼠肝移植慢排模型，探讨TGF-β/Smad 信号通路在肝移植慢排反应中关键作用，深入研究IDO 酶阻断TGF-β/Smad信号通路的靶点以及抗免疫与非免疫损伤对慢性排斥的双重保护机制，从而发现肝移植慢排治疗的新途径。.方法：以DA大鼠为供体，BN大鼠为受体，建立稳定的大鼠肝移植慢排模型。实验分为六组。组A：同品系肝移植组（SD→SD），组B：异品系肝移植急排组（SD→Lewis），组C ：异品系肝移植慢排组：小剂量环孢素A处理（DA→BN），组D：Decorin 中和TGF-β慢排组(DA→BN），组E：上调IDO 基因慢排组（DA→BN）， 组F：1-MT 抑制IDO酶慢排组（DA→BN）.结果：1、与同品系肝移植组相比，异品系肝移植慢排组、Decorin 中和TGF-β慢排组急排、慢排评分均显著升高（P<0.05）；其中异品系肝移植急排组急排评分显著高于异品系肝移植慢排组，与Decorin 中和TGF-β慢排组无显著差异；异品系肝移植慢排组慢性排斥评分与Decorin 中和TGF-β慢排组无显著差异。2、与同品系肝移植组相比，异品系肝移植慢排组、Decorin 中和TGF-β慢排组炎症因子、TGF-β/Smad通路相关蛋白、受体表达明显增加（P<0.05）。异品系肝移植慢排组、Decorin 中和TGF-β慢排组肝细胞凋亡指数、T细胞浸润情况也与同品系肝移植组有显著差异（P<0.05），但异品系肝移植慢排组与Decorin 中和TGF-β慢排组无明显差异。3、与上调IDO 基因慢排组相比，异品系肝移植慢排组、1-MT 抑制IDO酶慢排组慢排评分、炎症因子、TGF-β/Smad通路相关蛋白、受体、肝细胞凋亡指数、T细胞浸润明显升高（P<0.05）；IDO基因表达、IDO酶活性显著降低（P<0.05），活性氧水平显著升高（P<0.05）。.结论：异品系大鼠肝移植术后将发生严重的慢排反应，其机制可能是活性氧大量生成，激活了TGF-β/Smad通路，从而介导严重的慢排反应。使用Decorin单纯阻断TGF-β/Smad 通路，虽能延缓肝移植慢排纤维化，但效果不明显，且增加急排程度。上调IDO 基因，可促进IDO酶活性增加，使活性氧水平显著降低，不仅阻断TGF-β/Smad通路，也降低体内炎症因子水平，从而对肝移植后慢排免疫与非免疫损伤具有双重保护作用。