周细胞增强内皮祖细胞在游离脂肪移植再血管化中的效能

Autogenous fat grafting is one of the biggest concerns for surgeons.However,parts of fat can not survive because of the failure of revascularizaton, and then the operation result is weakened. Endothelial progenitor cells (EPCs) can directionally differentiate to endothelial cells (ECs)，and is better than endothelial cells in migration and multiplication capacity.It is reported EPCs can improve the revascularization of the fat grafts. There is a symbiotic relationship between pericyts (PCs) and ECs. PCs can enhance the migration, proliferation and lumen formation at early phase of angiogenesis,and keep the structure and function normal at latter phase. Therefore,we suppose PCs can improve the effect of EPCs on promoting fat grafts revascularization. We plan to observe in vitro the effect of PCs on the proliferation and differentiation of EPCs,and plan to measure the quantity and quality of survived fat and neovascularization by pathologic and immunohistochemical analysis,the angiogenesis level by ELISA and Western blot after PCs and EPCs are mixed with fat at all once and injected into nude mices subcutaneously. We also plan to observe the level of fat revascularization after mices are treated with PCs PDGFRβagonist and inhibitor respectively to further study the effect of PCs on fat grafts revascularization. The innovation of this study is to introduce PCs to fat grafting, to firstly observe the effect of PCs on fat grafts revascularization, and firstly probe into the effect of PCs on the proliferation and differentiation of EPCs.

自体脂肪游离移植备受关注，但大部分脂肪移植后不能快速再血管化，发生缺血坏死，影响手术效果。内皮祖细胞定向分化为内皮细胞，并有较强的迁移和增殖能力。有研究表明内皮祖细胞可增加脂肪移植后周边血管长入。周细胞与内皮细胞为共生状态，在早期促进内皮细胞迁移增殖、管腔形成，在后期维持血管结构功能稳定。所以，本研究提出假设--周细胞能增强内皮祖细胞促脂肪再血管化的效能。研究预通过体外实验观察周细胞对内皮祖细胞增殖和分化的影响；并将二者同时与脂肪混合植入裸鼠皮下，通过病理学、免疫组化学检测脂肪存活数量和质量、新生血管的数量和质量；通过酶联免疫、蛋白免疫印迹观察血管新生的活跃程度；并用周细胞PDGFβ受体通路激动剂和抑制剂处理裸鼠，进一步观察周细胞在内皮祖细胞促血管形成中的作用。研究的创新在于首次将周细胞应用于促进脂肪再血管化研究，首次观察周细胞对内皮祖细胞的影响，为临床应用细胞治疗学改进脂肪移植技术依据。

一，脂肪间充质干细胞（ADSCs）获取容易、供区损伤小，所以有利于临床应用。但是ADSCs的特性因患者的年龄和取材部位不同而有差异。本研究系统的评价了年龄因素对胸部皮下脂肪获取的ADSCs的数量和质量的影响。ADSCs分别从儿童组、青年组、老年组病例获取。所有年龄组都可以获得ADSCs，而且随年龄增长仍然保持间充质干细胞的特性。随年龄的增加ADSCs的分离数量下降、增殖减慢，但是差异不显著。随着年龄增加，老年组ADSCsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞增加、线粒体ROS增多、 p53 和 p21的表达升高。 随着年龄的增加，ADSCs成脂成骨分化的潜能降低，尤其在诱导分化的早期和中期，意味着老年组的ADSCs对诱导因子反应缓慢。老年组的ADSCs的迁移能力减弱，这和老年ADSCs趋化因子受体的表达下降有关。总之，不同年龄组的ADSCs的表型相似，功能却有很多不同。如果用ASDCs进行细胞辅助治疗时，应该考虑年龄因素对ADSCs分化和迁移能力的负面影响。.二，自体脂肪移植修复软、硬组织缺损前景广阔，但脂肪成活率不可预知，往往较低，是阻碍其应用的主要问题。本研究将脂肪中加入富含血小板血浆（PRP）、ADSC，植入裸鼠背部皮下，10周后取出进行病理学检查。PRP没有提高移植脂肪的成活率，但促进坏死组织的吸收。SDSCs没有提高移植脂肪的成活率，但促进纤维肉芽组织的形成。PRP和ADSCs可以协同增加移植脂肪的成活率，同时能加速坏死组织的吸收，且不促进纤维肉芽形成。所以，提高移植脂肪的成活率需要PRP和ADSCs的共同作用。