消栓通络有效成分组基于"神经血管单元（NVU）"治疗缺血性中风的机制研究

Ischemic stroke seriously endanger people's health, and traditional Chinese medicine played a significant role featuring multi-link, multi-target. Our previous study found that XiaoShuanTongLuo effective compounds group (XECG) had significant effects on angiogenesis and neuroprotection, consistent with the "neurovascular unit (NVU)"emphasis on a total unity in the blood vessels, nerves and cell matrix. This study intends to clarify the mechanisms of XECG treatment of ischemic stroke through whole animal, cell and tissue experiments with NVU as a putative target. MCAO and 4VO rats and in vitro brain slice model were established to mimic ischemic stroke, and pathological and ultrastructural changes in brain were observed to determine the effects of XECG on angiogenesis and neuroprotection by electron microscopy and immunofluorescence. The damages in NVU in vitro were introduced by hydrogen peroxide, glutamate and hypoxia, respectively. The interaction between the endothelial cells on the supplying pool side and the neurons and glial cells on the recepting pool side was investigated to calrify the order of lesion in the brain parenchyma and vascular system in ischemic stroke, and the effects of XECG and its mechanisms were determined. These studies will illuminate the mechanisms of XECG on ischemic stroke through NVU protection, and lay foundation for the development and use of anti-ischemic stroke drug.

缺血性中风严重危害人们的健康，我国传统中医药从多环节、多靶点发挥作用，疗效显著。我们前期研究发现，消栓通络有效成分组（XECG）有显著的促血管新生和神经保护作用，与"神经血管单元（NVU）"强调血管、神经元和细胞基质共为一体又相互作用是一致的。本研究拟从整体、细胞和组织水平围绕NVU开展XECG治疗缺血性中风的作用机制研究。制备大鼠MCAO和4VO缺血性中风模型以及脑切片模型，通过电镜和免疫荧光技术观察脑组织的超微结构变化，考察XECG对NVU的影响；建立体外NVU细胞模型，应用过氧化氢、谷氨酸以及缺氧模拟缺血性中风损伤，考察供池侧内皮细胞与受池侧神经元和胶质细胞在XECG作用下的相互影响；探讨缺血性中风发生过程中，脑实质病变与血管系统病变的相互作用，确证NVU在缺血性中风发病机制中的地位，阐述XECG保护NVU治疗缺血性中风的作用机制，为抗缺血性中风药物的开发和利用奠定基础。

缺血性中风严重危害人类健康，寻找有效治疗中风的药物具有重要意义。消栓通络有效成分组（XECG）是从消栓通络方中提取获得的多种有效成分组合，具有神经保护作用，但其机制不清。.大脑中动脉内线栓法（MACO）建立大鼠脑缺血模型，考查XECG的神经保护作用。采用ELISA和Western-blot等技术检测炎症因子、凋亡相关因子及血管新生、神经生成相关因子的表达，探讨XECG的缺血损伤保护机制。研究结果表明：XECG对脑缺血损伤有显著的神经保护作用，能有效改善急性脑缺血所致的大鼠神经行为功能障碍，缩小缺血后脑梗死范围，降低缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性，改善缺血后脑组织病理学变化。缺血再灌注大鼠脑组织VEGF和BDNF的表达增加，XECG可进一步促进VEGF和BDNF的表达，说明其可促进缺血后血管新生和神经修复；XECG能促进Bcl-2/Bax凋亡调节蛋白家族平衡的回复以对抗缺血所致的细胞凋亡；XECG可有效降低因缺血造成的炎症因子TNF-、IL-l等的表达，抑制炎症反应。.建立体外神经血管单元（NVU）细胞模型，通过氧糖剥夺/再复供（OGD/R）损伤，进一步探讨神经元、星形胶质细胞、微血管内皮细胞在XECG作用下的影响以及可能涉及的机制。研究结果表明：XECG及其有效成分可以提高OGD/R损伤后各类神经细胞的存活率，减少LDH漏出量，抑制细胞凋亡，减轻OGD/R造成的细胞损伤。XECG有效成分可提高OGD/R损伤后PC12细胞和星形胶质细胞线粒体膜电位，调节OGD/R损伤后各类细胞内凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达；其有效成分可增加OGD/R损伤后星形胶质细胞内SOD活力和GSH含量，减少MDA，抑制OGD/R引起的氧化应激作用，并可激活神经细胞内JAK2/STAT3通路和PI3K/AKT信号通路。.上述研究结果表明，XECG对脑缺血再灌注损伤的保护作用，是通过促进缺血后血管新生和神经修复、促进Bcl-2/Bax凋亡调节蛋白家族平衡的回复、抑制炎症反应、提高受损细胞抗氧化能力等多种途径实现，并与JAK2/STAT3通路和PI3K/AKT信号通路的激活有关。