蛋白4.1R在CD8+T细胞活化信号转导中的调控机制

蛋白4.1R最初是在红细胞中发现的细胞膜骨架蛋白分子，我们在前期研究中首次发现4.1R在T细胞中与免疫突触形成有关，且证实4.1R与T细胞活化连接子LAT直接结合并抑制ZAP-70对LAT的磷酸化,在CD4+T细胞活化和信号转导的起始阶段发挥负调控作用。但4.1R在CD8+T淋巴细胞活化中的免疫生理效应及作用机制在国内外均未见报道。本项目拟利用4.1R基因敲除小鼠和4.1R表达缺失CD8+T淋巴细胞，研究4.1R在 CD8+T淋巴细胞活化中的免疫生理效应，并探讨4.1R基因缺失对TCR/CD3启动的CD8+T淋巴细胞信号转导的影响及对移植瘤的耐受性影响，以期阐明4.1R在CD8+T淋巴细胞活化中的生物学功能及可能的分子机制，为证实细胞骨架蛋白4.1R是又一新发现的CD8+T细胞活化及信号转导中的调控因子提供实验依据。

蛋白4.1R最初是在成熟红细胞中发现的大小为80KD细胞膜骨架蛋白分子，是将红细胞跨膜蛋白和血影蛋白-肌动蛋白骨架网络连接起来的桥梁，对维持红细胞的正常形态、粘附、脆性及生理功能发挥着重要的作用。蛋白4.1R在T细胞中也表达，但其在T细胞中的功能还不清楚。本项目利用了4.1R基因敲除小鼠和4.1R表达缺失的CD8+ T细胞，研究4.1R对TCR/CD3启动的CD8+ T细胞的活化、增殖、细胞周期、细胞因子的产生、移植瘤耐受性及TCR/CD3相关信号分子磷酸化水平的影响，研究结果表明：CD8+ T细胞的TCR受到刺激后，蛋白4.1R被招募到免疫突触处且与LAT共定位；蛋白4.1R缺失导致 CD8+T细胞的活化、增殖及分泌IFN-γ、IL-2的能力明显增强，LAT及其下游信号分子ERK的磷酸化水平增强；蛋白4.1R的缺失导致CD8+T细胞体外杀伤肿瘤细胞效果提高，小鼠体内移植瘤耐受性增强。已有报道表明蛋白4.1R与LAT直接结合而抑制ZAP-70对LAT的磷酸化，进而影响T细胞的活化等功能，因此我们的研究结果进一步的表明了蛋白4.1R在CD8+ T细胞的活化、增殖和抗肿瘤免疫中发挥的负调控作用，同时表明蛋白4.1R在CD8+ T细胞活化信号转导中通过抑制LAT的磷酸化而发挥重要的作用。我们还研究了蛋白4.1R对光动力效应（PDT）效应的影响，结果显示蛋白4.1R的缺失导致细胞PDT敏感性下降，蛋白4.1R可能影响了5-ALA的跨膜转运功能。蛋白4.1R可以通过抑制CD4+T细胞的活化阻止自身免疫性疾病MS/EAE的发生。这些研究结果为我们了解蛋白4.1R的功能提供了更多的依据，也为临床PDT的个体治疗提供理论指导意义。重组融合蛋白TLR-2激动剂rMBP-NAP具有显著地抗肿瘤效果，可以作为抗肿瘤免疫治疗的候选药物。