棉酚对新疆多浪羊白细胞介素表达影响的研究

新疆畜牧业面临很大的发展机遇，由于天然草场的退化，将棉花副产品应用于养殖，在我们新疆称为一种解决饲草问题的最为有效的方法，但棉花副产品含有游离棉酚，对机体是一种细胞毒、血液毒、血管毒和神经毒，而制约了其在养殖业中的应用，有学者开展过许多其对机体的毒性作用、抗肿瘤活性、抗生育能力等方面的研究，但是棉酚对机体免疫调节作用方面的研究较少，未见其对绵羊机体免疫分子影响的研究报道。鉴于此，本课题从免疫分子水平来研究棉酚对绵羊免疫功能的影响，从免疫学角度寻找绵羊棉酚中毒的解决方案。拟通过构建饲喂不含棉酚饲料和含棉酚饲料的多浪羊白细胞cDNA文库，应用DD-RTPCR寻找差异表达cDNA片段，克隆、鉴定后筛选白细胞介素的全长序列；同时，应用荧光定量PCR或半定量PCR技术来检测棉酚对多浪羊白细胞介素表达的变化，分析棉酚的摄入后白细胞介素表达的变化规律。该课题的研究将为绵羊免除棉酚对机体的危害奠定基础。

本项目完成了新疆多浪羊淋巴细胞cDNA文库和棉酚刺激后的多浪羊淋巴细胞的cDNA文库的构建，原始文库滴度分别是5.6×106和3.8×106，扩增后的文库滴度分别是1.5×1010和2.8×109，克隆了多浪羊IL-1、IL-8、IFN-γ基因，基因大小分别是862、718、582bp,并构建了IL-1、IL-8、IFN-γ原核表达载体，并进行了原核表达，对IFN-γ进行了抗原性分析。将IL-8标记探针后，从cDNA文库中筛选与炎症反应相关的基因；同时，应用荧光定量PCR或半定量PCR技术来检测了不同浓度棉酚作用于淋巴细胞后IL-8、IL-18的表达量变化，并应用荧光定量PCR技术检测了不同浓度棉酚作用于淋巴细胞后IL-1、IFN-γ的表达量变化。该项目培养硕士研究生4名（2名已经毕业，1名2013年毕业，1名2014年毕业），发表论文9篇（其中硕士学位论文2篇），申请国家发明专利1项。