氯通道在缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用及其机制的研究

缺血性脑损伤神经元凋亡的机制目前尚未完全阐明，临床也无特异性的治疗方法。积极寻找神经元凋亡的特异性靶点分子具有理论和现实价值。本研究利用离体和在体缺血性神经元凋亡模型,采用膜片钳技术、形态分析技术、信号蛋白分析等技术，通过观察海马CA1区神经元氯通道功能活动和凋亡信号通路中信号蛋白的变化，探讨凋亡相关的氯通道活动在神经元凋亡中的作用并分析氯通道功能异常导致神经元凋亡的分子机制,从阴离子通道层面观察离子通道与缺血性脑损伤神经元凋亡之间的关系，为临床缺血性脑损伤的产生机制和靶点药物的治疗提供新的实验参考和理论依据。

缺血性脑损伤是一种严重影响人类健康的疾病，若能拮抗或阻止神经元凋亡对脑损伤的预后具有重要价值。缺血性脑损伤神经元的机制尚不完全清楚，临床尚无特意有效的治疗药物，揭示神经元凋亡机制寻找相对有效的特异性抗凋亡药物具有重要意义。氯通道在缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用研究较少。本研究利用离体实验和在体实验观察了氯通道阻断剂对大鼠海马神经元凋亡的影响。本研究模拟缺血性脑损伤氧化应激理论，用NO供体SIN-1诱导离体培养大鼠海马神经元凋亡，结果显示在大鼠海马神经元上有ClC-3分布，氯通道阻断剂DIDS能削弱ClC-3基因的表达和氯通道电流，削弱活性caspase-3和PARP-1/AIF分子蛋白的产生，拮抗神经元的凋亡；在体实验结果显示，DIDS能保护缺血再灌注大鼠海马神经元的凋亡；利用RNA干扰技术沉默ClC-3基因结果显示，转染siRNA-ClC-3的细胞可拮抗诱导剂H2O2诱导的PC-12细胞凋亡。本研究结果提示：氯通道阻断剂DIDS可以拮抗神经元的凋亡；ClC-3氯通道可能参与了海马神经元的凋亡；DIDS可能通过Caspase-3依赖性和非依赖性途径拮抗神经元凋亡。本研究从阴离子角度探讨了缺血性脑神经元凋亡的机制，为研究缺血性脑损伤神经元凋亡机制提供了一定的实验依据，为探索和寻找拮抗神经元凋亡的靶点药物提供一定的理论参考。