Akt1对PMS2表达的靶向调控作用及临床意义

肿瘤的发生发展具有明显的遗传倾向或相关性。因此，从基因水平寻找肿瘤早诊断与治疗的靶点成为当前研究的热点和难点。我们前期的基础与临床研究已证实位于7号染色体上的肿瘤错配修复基因PMS2的表达与卵巢癌有明确的关系，并首次证实了GSK-3β能够直接调控PMS2的稳定表达。进一步的信号通路与基因分析发现新的共有基序 ：蛋白PMS2在T156位点存在Akt1识别以及磷酸化的共有模序YPRPRGT156TVSV，预实验表明此基序能够作为GSK-3β的一个重要上游蛋白Akt1识别及磷酸化位点。因此，我们推测蛋白Akt1可能是蛋白PMS2表达调节中的关键因子。本项目拟从细胞、组织和临床水平研究Akt1与PMS2稳定表达的调控机制以及与卵巢癌发生、发展以及预后的关系。不仅是对前一国家自然基金项目研究的丰富和发展，并有望更深入地明确PMS2的表达调控及临床意义，为卵巢癌的早期诊断以及靶向治疗提供实验依据。

人类DNA错配修复（MMR）蛋白在DNA复制期间可以纠正DNA错配，而MMR基因的缺乏可导致基因组不稳定性和肿瘤发生。但是，错配修复蛋白的调节机制并不是很清楚，尤其是关于MutL蛋白成员之一的人类减数分裂后分裂蛋白2（hPMS2）。在本次研究中，通过Western Blot检测，我们发现在9种不同肿瘤细胞株中hPMS2与活化的akt1呈负相关。我们通过siRNA、Akt抑制剂、Akt/PKB 信号通路抑制剂-2（API-2）和胰岛素样生长因子（IGF-1）等调控Akt活性，利用功能试验进一步证实活化的Akt 对hPMS2表达呈负相关。此外，运用免疫共沉淀和CHX进行蛋白稳定性分析发现活化Akt（P-AktS473）与hPMS2可以直接结合，并影响其稳定性。而且，细胞免疫荧光检测的结果发现阻断AKT活性导致hPSM2蛋白在细胞核处聚集。进一步研究证明PMS2介导的铂类所致DNA损伤后的促凋亡作用和细胞周期G2/M期停滞，可能影响卵巢癌细胞对铂类药物作用的敏感性，从而参与铂类耐药的发生。这些研究表明活化的Akt是调节hPMS2表达、稳定性及核定位的上游信号，PMS2可能影响卵巢癌铂类耐药，从而对肿瘤细胞中hPMS2表达调控机制提供了一个新观点。