牛泡沫病毒Bet蛋白的功能及作用机制研究

泡沫病毒具有独特的基因组结构、表达调控机制和特殊的进化地位，可能是正反转录病毒和嗜肝DNA病毒等副反转录病毒之间进化的桥梁，也是构建反转录病毒基因转移载体良好的出发毒株。本研究拟探索牛泡沫病毒BFV3026的调节基因bet的特征及功能， 通过分析bet 基因启动子的结构、mRNA出现时间、蛋白表达量与病毒复制周期及感染模式的关系等，揭示Bet调控病毒基因转录的分子机制，及其与Tas蛋白共同调控泡沫病毒由早期基因向晚期基因表达转换的过程，为解析泡沫病毒独特的基因表达调控机制及进化地位提供依据，为全面认识反转录病毒及相关重要致病病毒（免疫缺陷病毒与乙型肝炎病毒）的致病机理提供新视角，同时作为将泡沫病毒改建为基因转移载体的必备理论基础。

泡沫病毒具有独特的基因组结构、表达调控机制和特殊的进化地位，可能是正反转录病毒和嗜肝DNA病毒等副反转录病毒之间进化的桥梁，也是构建反转录病毒基因转移载体良好的出发毒株。本研究围绕BBet蛋白对BFV复制的负调控作用展开，主要包括以下几个方面：1、获得可灵敏、定量检测BFV复制及感染性改变的指示细胞系；2、构建了野生型和缺失BBet的BFV感染性克隆及稳定表达BBet的细胞系，在病毒水平确证了BBet对BFV复制的负调控作用；3、在分子水平确证了BBet对BTas激活BFV LTR/IP的抑制作用。 4、对BBet负调控BTas的反式激活作用的分子机制进行了研究：证明BBet蛋白可二聚化，BBet不影响BTas在细胞中的定位，BBet蛋白自身不能结合BFV-LTR/IP，确证BBet与BTas之间的相互作用并初步界定其相互作用区域；BBet通过干扰BTas蛋白的二聚化，从而抑制其转录激活作用，进而影响BFV的复制活性。上述实验结果，证实了BBet在BFV复制周期中的负调控作用，初步揭示其负调控的分子机制，表明BBet可能是BFV潜伏感染的重要原因之一。