腺苷A2A受体失活抑制小鼠视网膜病理性新生血管生长的细胞机制研究

正常视网膜组织中血管代谢受促血管生成因子和抗血管生成因子的精密调控，呈动态平衡。在糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变等病理情况下，组织缺血缺氧，动态平衡即被破坏，导致病理性新生血管生成，后者严重干扰和破坏视网膜的结构和功能，是目前世界范围的致盲性眼病。开发有效的抗新生血管药物一直是全球眼科研究的热点。本项目拟采用小鼠氧诱导视网膜病变模型，结合视网膜铺片、组织切片、免疫荧光标记等形态学方法，及流式细胞仪定量检测，深入研究星形胶质细胞与血管内皮细胞的相互作用，从而明确星形胶质细胞在病理性血管生成中的作用。应用Cre-Loxp重组酶系统，选择性剔除小鼠星形胶质细胞上的腺苷A2A受体，以评估星形胶质细胞上A2A受体的作用。本研究旨在阐明腺苷A2A受体失活特异性抑制病理性视网膜血管生成的细胞机制，并评估腺苷受体抑制剂在抗视网膜新生血管治疗方面的临床作用，为防治人视网膜新生血管疾病提供一个新的方向。

本研究采用小鼠氧诱导视网膜病变模型，结合视网膜铺片、组织切片、免疫荧光组织化学等手段，首次发现（1）同日龄A2A基因敲除小鼠与野生型小鼠的视网膜血管发育同步；经高氧诱导，视网膜组织中A2A mRNA表达上调；A2A基因敲除抑制OIR小鼠病理性视网膜血管生成，与其下调OIR小鼠视网膜组织中VEGF基因表达相关；特异性A2A腺苷受体抑制剂KW6002减少视网膜无血管面积和新生血管面积，对视网膜缺血有保护作用。（2）腺苷受体抑制剂咖啡因抑制了视网膜病理性新生血管反应，而不影响视网膜生理性血管发育；与A2A受体基因敲除效果相似，其作用机制可能与其改变A2A受体基因表达有关。咖啡因给药组，其OIR小鼠视网膜胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达更为密集，着染加深，以神经纤维层及节细胞层最为明显。GFAP表达增加反映了星型胶质细胞的增生和发育，对神经元损伤修复有重要意义。（3）应用特定的条件性基因敲除技术，敲除星形胶质细胞的A2A受体，及GFAP cre+/A2AR-/-，与相应的基因型对照组相比GFAP cre+/A2AR+/-, GFAP cre-/A2AR-/-和 GFAP cre-/A2AR+/-相比，其据视网膜铺片显示，视网膜无血管区和新生血管面积与对照组无明显变化。上述结果证实A2A受体可作为抑制新生血管潜在的新的靶点，特异性抑制病理性新生血管，而不影响其生理性血管发育，其受体抑制剂的临床应用可为视网膜新生血管疾病提供一个新的方向。