EB病毒启动子的变异及其在鼻咽癌中的意义

我们已经证明了鼻咽癌相关的突变型EBV核抗原1与EBV增强子FR的结合能力，以及转录激活能力均明显增强，那么，在鼻咽癌细胞中EBV的启动子区域内是否有特异性的核苷酸变异？我们的研究首次发现EBV的Q启动子区有两个与鼻咽癌相关的突变位点，其中+1G>C的突变能明显增强启动子的转录活性。通过计算机辅助预测+1G>C突变位点位于一个潜在的热休克因子1（HSF1）结合序列内，进一步的实验证实HSF1对Qp有转录激活作用。同时，我们在EBV的Cp和LMP1-TR启动子区也发现了鼻咽癌特异性的变异位点，且均对启动子的转录活性有明显影响。本课题拟采用报告基因实验、EMSA和CHIP等方法，检测EBV启动子的变异对潜在的转录因子结合位点的影响，以期阐明突变型的EBV启动子在EBV基因表达中的作用，为确立EBV在鼻咽癌中的致瘤作用提供更充分的科学依据。

EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）与鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma, NPC）有密切的相关性。我们以往的研究发现，V-val突变型的EB病毒核抗原1（EBV encoded nuclear antigen 1, EBNA1）基因与NPC有密切的联系。那么，在EB病毒的启动子区域有无特异性的碱基变异，其变异在EBV相关肿瘤发生中的意义如何？我们检测了EBV启动子Cp和Qp的碱基序列。发现在NPC中，Qp序列常有-197 G>A和+1 G>C的特异性突变，Cp常有-12G>T和+69 C>T的特异性突变。并且Qp+1C的变异可以显著提高Qp的活性，而Cp+69T的变异可以显著降低Cp的活性。EBV启动子从Cp到Qp的转换是癌变过程中的重要一步，因此，NPC组织中Cp活性的下降以及Qp活性的升高在肿瘤的发生中具有重要的意义。此外，我们预测到Qp+1G>C突变点正好位于一个潜在的热休克元件区域内。在热休克作用下，EBV+细胞株中从Qp起始的EBNA1转录量明显增加。EMSA和ChIP试验验证了热休克因子1（HSF1）与Qp的结合能力。我们发现了能调控Qp活性和EBNA1蛋白表达的一个新的转录因子 — HSF1，HSF1通过结合于Qp序列上的热休克元件而发挥转录激活作用。EBNA1是唯一在EB病毒相关肿瘤细胞中均有表达的蛋白，对于EB病毒的感染、复制和基因表达有重要的作用。HSF1诱导的EBNA1表达可能在癌变早期有重要的作用。我们还检测了NPC中潜伏膜蛋白1（latent membrane protein 1,LMP1）启动子L1-TR的序列。与原型相比，鼻咽癌组织中的L1-TR启动子区域有多处缺失、插入和点突变，且启动子活性明显降低。LMP1 的低表达可能通过减少其本身的细胞毒性和逃避机体的免疫监控等机制而有利于EB 病毒的潜伏感染，进而促进了鼻咽上皮的恶性转化。以上研究成果分别发表于《Virology》，《Eur Arch Otorhinolaryngol》和《中山大学学报（医学科学版）》。为了更进一步地研究探讨鼻咽癌癌变的分子机制，我们又检测了鼻咽癌中microRNA的表达情况以及相应的microRNA与肿瘤转移、预后和治疗反应性的关系。研究成果分别发表于《Cancer Lett》和《J Transl Med》。