miR-338-3p在肝癌细胞上皮-间质转化中的作用机制研究

上皮间质转化（EMT）是肿瘤（包括肝癌）侵袭和转移早期的重要过程，其主要特征之一是上皮细胞极性丧失。研究显示miR-338-3p是维持上皮细胞极性所必需的，但其对EMT 的作用及其机制尚不清楚。申请者发现：miR-338-3p是个新的抑癌miRNA，可显著抑制肝癌细胞的迁徙，并证实SMO为其靶基因。研究已表明SMO依赖性的Hh信号通路是促进EMT的重要通路。在此基础上，本课题提出："miR-338-3p能通过调控Hh信号通路抑制肝癌细胞EMT 的发生"这一假说。本项目拟采用基因转导、PCR、western blotting等方法，以获得miR-338-3p通过调控Hh信号通路抑制肝癌细胞EMT的可靠证据；同时在临床大量肝癌标本中分析miR-338-3p、Hh信号、EMT之间的相关性及对肝癌临床病理、治疗和预后的意义。该项目将为确立miR-338-3p作为抑制肝癌EMT的新靶点提供科学依据。

上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）是肿瘤侵袭和转移早期的重要过程。最近研究发现miRNA对EMT有很强的调节作用。本课题组前期工作首次发现：miR-338-3p是个新的抑癌miRNA，可显著抑制肝癌细胞的迁徙，且证实SMO为其靶基因。但miR-338-3p是否能影响肝癌细胞EMT的发生及其机理尚不清楚。通过本项目的研究，我们发现通过miR-338-3p mimic恢复肝癌细胞中miR-338-3p的表达可逆转肝癌细胞EMT及抑制肝癌细胞侵袭与转移；反之，通过miR-338-3p inhibitor降低肝癌细胞中miR-338-3p的表达则可诱导肝癌细胞EMT促进肝癌细胞侵袭与转移。此外，miR-338-3p mimic和miR-338-3p inhibitor可分别抑制和促进Snail1（EMT上游调控转录因子）和Gli1（sonic hedgehog (SHH)信号通路关键转录因子）的表达。Snail1 siRNA可逆转miR-338-3p inhibitor对肝癌细胞EMT的诱导作用。进一步的研究还显示SHH信号通路是miR-338-3p inhibitor诱导肝癌细胞EMT及促进Snail1表达所必需的。miR-338-3p在肝癌患者组织标本中表达下调且与病人的生存周期密切相关。通过临床肝癌组织标本及动物原位肝移植模型组织标本证实miR-338-3p与E-cadherin表达成正相关，而与SMO, Gli1, Snail1, N-cadherin,及 vimentin表达呈负相关。本项目通过体内、外研究结果说明miR-338-3p通过SHH/Snail1信号通路抑制肝癌EMT。本项目结果不仅揭示miR-338-3p对肝癌细胞EMT的作用及其机制，而且将为确立miR-338-3p作为抗肝癌细胞EMT的治疗新靶点提供科学依据和理论基础。.本项目在完成原有计划的基础上还发现：血清循环miR-139-5p表达降低的程度可反映肝癌转移进展程度；过表达miR-139-5p后可逆转肝癌细胞EMT；并证实FAK为miR-139-5p靶基因。我们的结果表明miR-139-5p通过靶向抑制FAK，从而抑制肝癌EMT。这为确立miR-139-5p作为抗肝癌EMT的靶点治疗提供科学依据和理论基础。