温里药“温中散寒”功效与TRPA1受体关系的研究

瞬时受体电位通道家族A1（TRPA1）受体在胃肠道上广泛分布，参与胃肠功能的调节。桂皮醛、姜辣素、丁香酚是TRPA1受体激动剂，也是温里药的主要活性成分。本课题提出"温里药通过增加TRPA1受体表达、激活TRPA1受体引起通道开放，从而促进神经内分泌细胞释放5-HT及CCK，产生'温中散寒'功效"的假说。本课题拟开展以下研究：1）观察正常、"脾胃虚寒"证及温里药给药动物肠道TRPA1mRNA、蛋白表达和5-HT、CCK水平的变化情况，阐明上述指标变化与"脾胃虚寒"证之间的关系，并分析温里药的可能作用。2）采用桂皮醛、姜辣素、丁香酚激动体外培养的肠神经内分泌细胞上的TRPA1受体，检测胞内Ca2+浓度及5-HT、CCK水平变化，并进一步采用RNA干涉等技术来明确受体激动作用与上述指标变化的关系。通过本研究，将可能揭示温里药对胃肠功能调节作用的分子机理，为其"温中散寒"功效提供现代药理学解释。

目的：瞬时受体电位通道家族A1（TRPA1）受体在胃肠道上广泛分布，参与胃肠功能的调节。桂皮醛、姜辣素、丁香酚是TRPA1受体激动剂，也是温里药的主要活性成分。本课题从整体及离体两部分探讨温里药“温中散寒”功效的可能作用机制。方法：（1）整体实验部分，观察干姜、肉桂、丁香灌胃给药对正常、脾胃虚寒模型动物脾胃虚寒症状、肛温、脾脏及胸腺指数及5-HT、CCK水平的影响。（2）离体实验部分，采用TRPA1受体拮抗剂钌红阻断受体、低Ca2+溶液抑制Ca2+内流、静默TRPA1基因的方法，观察桂皮醛、姜辣素、丁香酚对体外培养的STC-1细胞内Ca2+浓度、CCK水平的影响，以及对RIN-14B细胞分泌5-HT水平的影响，分析上述指标变化与受体激动作用之间的关系。结果：（1）整体实验结果表明，干姜1.8g生药/kg、肉桂0.9g生药/kg及0.45g生药/kg、丁香0.6g生药/kg灌胃给药对模型动物的脾胃虚寒症状均有一定程度的改善作用；干姜1.8g生药/kg灌胃1周可使正常动物的肛温明显上升，肉桂0.9g生药/kg灌胃2周可使模型动物的肛温明显上升；干姜1.8g生药/kg、肉桂0.9g生药/kg可提高小肠CCK水平，肉桂0.9g生药/kg可降低小肠5-HT水平。（2）体外实验结果表明，丁香酚、桂皮醛、姜辣素可使STC-1细胞内的Ca2+水平明显升高，且呈一定的剂量依赖性；钌红、EGTA、siRNA基因静默对丁香酚200mM、桂皮醛100μM、姜辣素200mM升高[Ca2+]i水平的作用有明显的对抗作用；丁香酚200mM、桂皮醛100μM、姜辣素200mM可使STC-1细胞分泌CCK水平明显升高，钌红可明显对抗上述药物升高CCK水平的作用；丁香酚200mM对RIN-14B细胞分泌5-HT水平有升高趋势，桂皮醛100μM、姜辣素200mM可使5-HT水平明显升高，但钌红、EGTA、基因静默的对抗作用不明显。结论：干姜、肉桂、丁香改善脾虚动物症状可能与其升高小肠CCK水平，降低5-HT水平有关；丁香酚、桂皮醛、姜辣素促进神经内分泌细胞释放CCK的作用与激动TRPA1受体相关性较高，而其促进5-HT释放的作用与TRPA1受体关系不明显。综上所述，温里药产生“温中散寒”功效的作用机制可能部分与激动TRPA1受体有关。