CD45及剪接变构体在骨髓造血干细胞层面始动银屑病发病的机制研究

银屑病患者外周血TLC的免疫紊乱与其鼻祖骨髓造血干细胞（HSC）密切相关。表达CD45的HSC是一种具有向TLC分化潜能的淋巴样干细胞。CD45及其剪接变构体在TLC发育、生长、活化中起重要作用。我们近期研究证实银屑病患者CD45表达水平及CD45RO、RC比例的增高均参与银屑病发病，且在HSC层面即存在异常。为深入揭示CD45及其剪接变构体在HSC相关的银屑病发病机制中的作用，我们将以30例具有阳性家族史的中重度寻常型银屑病患者及健康对照者的HSC及PBMC为研究样本，探讨HSC CD45基因启动子甲基化程度与其表达水平的相关性；探讨HSC CD45外显子4及外显子6的单核苷酸多态性与PBMC中CD45变构体组成的关系；明确CD45单克隆抗体及甲基化抑制剂5-氮胞苷对HSC 向TLC分化的拮抗及促进作用，以明确CD45作为上游始动因素在银屑病发病中的意义，并作为靶位开发治疗银屑病的新药。

1，采集10例具有阳性家族史的中重度寻常型银屑病患者及10例健康对照者外周血单个核细胞，以甲基化PCR（MSP）-测序法检测CD45基因启动子的甲基化水平，结果发现正常人和患者5个CGP岛的甲基化水平均未见显著性差异，提示银屑病患者CD45表达水平的变化存在表观遗传学以外机制的调节。2，以变性高效液相色谱分析（DHPLC）联合扩增受阻突变体系（ARMS）PCR检测HSC CD45外显子4及外显子6的单核苷酸多态性，结果银屑病患者在CD45基因外显子4处无基因突变，外显子6基因突变率（A→G）显著高于正常人，且早发型、有银屑病家族史及中重度患者人群的 AG+GG基因型显著增高，提示外显子6的基因突变（rs4915154)与银屑病的发病相关。3，分析银屑病患者外周血CD45变构体的表达水平，发现银屑病患者外周血CD45RC+CD4+T细胞的百分比明显增高，与PASI评分无关，中重度银屑病患者CD45R0+CD4+T细胞的百分比明显增高，且与PASI评分正相关，提示CD45R0+CD4+T可能做为银屑病药物开发的作用靶点。4，研究发现与过敏性Lewis 大鼠模型相比较，自身免疫性BN大鼠模型骨髓中存在一群CD45阳性细胞，外周血CD45表达水平明显升高，提示CD45分子可能参与银屑病等自身免疫性疾病的发生。5，比较咪喹莫特银屑病模型鼠、咪喹莫特银屑病-Th1接触性皮炎复合模型鼠、咪喹莫特银屑病-Th2接触性皮炎复合模型鼠背部皮损的组织病理，炎症因子mRNA表达及外周血细胞因子水平，发现咪喹莫特银屑病-Th2接触性皮炎复合模型鼠表皮增厚及炎症细胞浸润明显，背部皮损 (IL)-17、 IL-22、IL-23、TNF-a 及 RORγt 的mRNA 水平升高, 血清 IL-17 、IL-22 水平升高，提示Th2型接触性皮炎可能通过IL-23/IL-17轴加重银屑病的病情，银屑病患者避免接触香料及橡胶等可能诱发Th2极性改变的产品。