日本血吸虫SjZFP1基因的RNA干涉研究

我们在前期研究中用对血吸虫具有致死性的东方田鼠血清筛选日本血吸虫噬菌体展示cDNA文库获得了日本环状（或PH型）锌指蛋白的编码基因SjZFP1，生物信息学分析及免疫预防实验显示该基因可能是血吸虫基因表达、生长发育的关键调节因子之一。本项研究拟通过RNA干扰抑制血吸虫SjZFP1的表达，详细研究表达抑制对体外培养血吸虫和体内血吸虫基因表达、生长、发育、性成熟、产卵、形态结构等的影响，分析SjZFP1在血吸虫血吸虫生长发育和基因调控方面的功能，确证SjZFP1是否是血吸虫生长发育的关键调节因子，为开发SjZFP1作为疫苗和治疗新药靶标提供理论基础。

日本血吸虫生活史极为复杂，其基因表达调控分子可能是虫体生长、发育的关键调节因子。锌指蛋白可以选择性激活/抑制特异基因的表达。本研究分析了日本血吸虫锌指蛋白编码基因SjZFP1在不同组织及不同期别虫体中表达规律，观察了SjZFP1在细胞中的分布，对体外培养血吸虫和小鼠体内血吸虫进行了SjZFP1基因进行了RNA干涉及干涉对虫体发育、产卵和虫卵孵化影响的研究。同时，本研究还对日本血吸虫SjColⅤ基因（Ⅴ型胶原蛋白）进行RNA干涉干涉研究。研究结果表明，SjZFP1基因在述各时期虫体中均有表达，尾蚴、毛蚴、虫卵、感染早期童虫和成熟雌虫中表达较高，主要分布于细胞核内；筛选到2对能有效干涉SjZFP1表达的小RNA分子；五次独立的SjZFP1基因RNAi实验结果表明尾静脉注射特异性siRNA分子对小鼠体内血吸虫SjZFP1基因的干涉可能为瞬时干涉，SjZFP1基因表达抑制可以显著降低小鼠载虫数、虫卵孵化率，在感染后期干涉还可以降低产卵量。SjColⅤ基因表达抑制后虫体体表结构发生了显著变化，干涉组虫卵孵化率降低了52.9%。研究结果显示SjZFP1基因和SjColⅤ基因在血吸虫生长发育、特别是产卵和虫卵孵化方面具有重要专用。通过项目的实施，已发表科研论文6篇，其中SCI收录论文5篇，待发表论文1篇,培养硕士研究生1名。研究成果为开发SjZFP1和SjColⅤ作为抗日本血吸虫病疫苗研制提供了理论基础。