四君子汤药效作用物质群及其相关功能菌组的研究

基于中药复方药效物质基础的研究现状和必要性、脾虚证与肠道菌群的相关性，以及四君子汤的功效特点，在前期研究基础上，我们提出并拟采用结合肠道菌群变化的体外模拟消化道代谢过程、体内代谢产物追踪的思路，通过比较四君子汤及单味药在正常及不同模型动物中代谢产物的变化，推测其主要成分代谢途径和方式，探索四君子汤作用的有效成分群及其变化规律，阐明其配伍的分子机制；分析不同模型动物及给予四君子汤后肠道菌群的变化，探索肠道菌群在四君子汤发挥药效中的直接作用，并确定与四君子汤功效相关的肠内菌组。本研究将为益气健脾中药复方的药效物质基础、作用机理等相关研究提供借鉴。这种基于体内过程、结合方药特性的中药作用物质的发现研究策略，较以往的分离提取/活性测试、以及活性跟踪分离的方法，更能反映中药的整体作用特性、直接获得效应物质的生物信息，为中药作用规律的阐述提供新的思路和研究方法。

本课题采用体外模拟胃肠道代谢方法系统研究了四君子汤及方中四味药（人参、白术、茯苓、甘草）的主要成分（群）的变化及规律，以及在健康/脾虚证大鼠体内的代谢变化，探讨了肠道菌群在四君子汤药效发挥中的作用，初步确定了与四君子汤药效相关的肠内菌。① 采用HPLC-DAD/ELSD、LC-MS技术对四君子汤及单味药进行定性分析，并指认了汤剂中的21个成分，证明汤剂的主要成分来源于人参（人参皂苷Rg1/Re，Rb1）和甘草（甘草黄酮苷、甘草酸）。② 采用体外模拟胃肠道环境（人工胃液、人工肠液以及人肠道菌液），首次对四君子汤水煎剂及方中四味药的单味煎剂进行代谢分析，明确其主要成分的变化及规律。研究发现：四君子汤主要成分在人工胃液、人工肠液中无明显变化；在肠道菌液作用下甘草黄酮苷迅速代谢为相应苷元，人参皂苷、甘草酸则缓慢代谢为相应的次级苷/苷元，表明四君子汤主要成分在消化道中的代谢部位为肠道；人肠道菌、正常及脾虚大鼠肠道菌液孵育代谢速率有所不同。③ 系统分析了四君子汤在健康及脾虚模型动物（大鼠）的体内代谢变化（尿样、血样、粪便样品）以及引起的肠道菌群的变化（采用GC-MS分析SCFAs，16S rDNA-PCR DGGE分析肠道菌基因组变化）。结果发现：四君子汤在健康、脾虚大鼠的代谢产物、代谢速率不同；四君子汤、白术水煎剂、人参水煎剂对脾虚大鼠肠道菌群的恢复有明显促进作用，茯苓水煎剂、甘草水煎剂对肠道菌群的恢复也有一定作用。④ 确定了四君子汤的体内直接作用物质群。发现四君子汤体内物质基础主要为甘草黄酮苷代谢产物、甘草酸代谢产物以及各种多糖成分。⑤ 确定了与四君子汤作用相关的肠内菌主要为一些能合成糖苷水解酶的厌氧菌。. 为了进一步验证肠道菌群的作用，尝试建立了抗生素模型的研究方法。同时对白术、茯苓活性多糖成分做了进一步研究。已公开发表研究论文6篇(其中SCI论文3篇)，为中药复方的体内物质基础及配伍规律研究提供了科学借鉴。