针刺调控VD脑内神经炎症反应及外周免疫抑制的效应及机制研究

Chronic cerebral ischemia induce two immune cascades: one is the local immune activation in the brain, which produces nerve inflammation, leading to nerve ischemic injury; another one is peripheral immunosuppression, which weakens the body's defenses, leading to increased incidence of infection. So, we think that there is a certain link among cerebral ischemia, enhancing brain immune and inflammatory response and peripheral immunosuppression. Peripheral immunosuppression might be the body's adaptive response to reduce postischemic brain inflammation, but increase the susceptibility to infection. Preliminary studies found that activated brain immune and inflammatory responses and peripheral immunosuppression coexisted in VD rats. Acupuncture could positively regulate the number of CD4+T, CD8+T lymphocytes and the levels of IL-1β and TNFα in hippocampus and blood. The results confirmed that the correlation between brain immune and inflammatory responses and peripheral immunosuppression actually existed, and the effect of acupuncture treatment was closely related to the body's immune function. Therefore, the current study intends to link peripheral immunosuppression and brain inflammation, and observes the effect of acupuncture on cerebral immune activation and peripheral immunosuppression through flow cytometry, immunofluorescence chemistry and molecular biology techniques. The current study also intends to clarify the interactions of both cerebral immune activation and peripheral immunosuppression and provides experimental evidences for the mechanism of acupuncture treatment for VD.

VD慢性脑缺血激发了两条免疫级联效应：一条是脑内局部的免疫激活，其产生神经炎症，导致神经缺血损伤；另一条是外周免疫抑制，其削弱了机体的防御能力，导致感染发生率升高。我们认为，脑缺血--脑免疫炎症反应增强--外周免疫抑制之间存在一定联系，外周免疫抑制可能是脑缺血后的一种适应性反应，机体藉此减轻脑部炎症，但却增加了感染的易感性。 我们预实验发现，脑免疫炎症反应增强和外周免疫抑制现象在VD鼠体内共存，针刺对海马与血液中的CD4+T、CD8+T淋巴细胞数量及IL-1β和TNFα水平均具有良性调节作用。证实上述联系客观存在，也提示针刺通过调节免疫功能来发挥神经保护作用。 因此本项目拟将外周免疫抑制与脑神经炎症反应相联系，从临床和基础研究两个方面，采用流式细胞术、免疫荧光化学、分子生物学等技术，阐明针刺调控脑局部免疫激活及外周免疫抑制的效应及二者的相互作用规律，为针刺治疗VD及并发症提供新思路。

临床发现VD患者肺炎发生率高、愈后差、死亡率高；且仅用意识模糊、吞咽障碍、误吸等理由不足以解释该现象。资料显示，脑缺血患者体内淋巴细胞数量减少、功能钝化。脑缺血小鼠易于发生肺炎，且在血液和肺检出细菌之前，就可见脾萎缩、循环中淋巴细胞数量减少等免疫学变化。推测脑缺血不仅导致脑内免疫激活，还可诱发外周免疫抑制。.本项目临床部分采用MMSE、ADAS-cog等量表观察VD患者认知能力等变化，并采用流式细胞术等方法检测外周血中免疫细胞亚群百分比及炎性因子水平。基础部分以VD鼠为模型，采用Morris水迷宫检测动物的认知功能；流式细胞术等方法检测脑、外周血、肺、脾中免疫细胞亚群百分比、炎性因子水平、脑内炎性细胞浸润情况。结果发现，针刺能改善VD患者的认知障碍以及日常生活能力，且疗效在治疗结束后一段之间内保持稳定。针刺能提高VD患者外周血中T、CD4+T细胞的比例及CD4+/CD8+比值，增加IFN-γ水平，降低TNF-α水平。针刺能提高VD大鼠的学习记忆能力；针刺能抑制VD鼠外周炎性细胞的中枢浸润；上调外周组织中各淋巴细胞比例，下调海马中各淋巴细胞比例；促进中枢抗炎因子IL-4、IL-10等表达，抑制促炎因子IFNγ等表达；在外周则相反。.以上结果证实，缺血性脑损伤一方面导致脑内局部的免疫激活，其产生神经炎症，导致神经缺血损伤；另一方面导致外周免疫抑制，其削弱了机体的抗菌防御能力，导致感染发生率升高。外周免疫抑制可能是脑缺血后的一种适应性反应，机体藉此减轻脑部炎症，但却增加了感染的易感性。而针刺作用于机体的的细胞免疫和体液免疫过程，一方面抑制外周炎性细胞的中枢浸润；从而减轻脑组织的炎性损害；另一方面减轻外周的免疫抑制，降低感染风险。从而发挥对脑内免疫增强及外周免疫抑制的双重良性调节作用。.本项目研究结果为阐明针刺效应机制开辟新的切入点，也为临床治疗VD 及并发症提供新思路。