双组分信号转导系统CpxA/CpxR调控胸膜肺炎放线杆菌致病性机理研究

胸膜肺炎放线杆菌（APP）是当前严重危害养猪业一种重要病原菌。了解双组分信号转导系统调控APP致病性机制对于预防和治疗疾病具有重要意义。本实验室已完成我国流行APP血清3型菌株全基因组测序。通过生物信息学对CpxA/CpxR双组分系统分析，构建缺失突变株并开展致病性试验，发现CpxA/CpxR与致病性相关。因此，本项目拟以CpxA/CpxR为研究对象，通过CpxA/CpxR缺失突变株、基因表达谱芯片及生物信息学分析，筛选毒力相关差异表达基因并利用real-time RT-PCR验证。通过凝胶阻滞、引物延伸、DNase I足迹等实验和SPR仪筛选CpxR直接调控基因及结合位点。进一步对CpxA/CpxR直接调控毒力相关基因开展致病性分析。通过以上研究，阐明CpxA/CpxR调控APP致病性的机理，为APP新型疫苗研制和药物靶标筛选奠定基础。

胸膜肺炎放线杆菌（APP）是当前严重危害养猪业的一种重要病原菌。双组份调控系统（TCS）具有参与调控细菌致病性、生长代谢、耐药性、毒力因子表达等多种重要生物学功能。本项目通过缺失猪胸膜肺炎放线杆菌双组份调控系统cpxA/cpxR突变、基因表达谱芯片及生物信息学分析，筛选毒力相关差异表达基因并利用荧光定量PCR、EMSA，获得了直接调控的毒力相关差异表达基因。进一步对cpxA/cpxR直接调控毒力相关基因开展致病性分析。通过项目三年的执行，获得cpxA/cpxR突变株和互补菌株，细胞黏附、侵染、吞噬、小鼠毒力等试验证实了cpxA/cpxR缺失导致了APP致病力降低。通过突变株和野生菌株基因表达谱芯片，筛选了9个明显差异表达基因，并通过了荧光定量PCR进行验证。EMSA试验最后证实pilM受双组份调控系统cpxA/cpxR直接调控。通过以上研究，阐明双组份调控系统cpxA/cpxR调控APP致病性的机理，为APP新型基因工程疫苗研制提供了重要材料。项目发表相关论文13篇，其中SCI收录12篇，CSCD研究论文2篇，获得专利1项。培养研究生4名，其中博士1名，硕士3名。