基于STAT3/Bcl6通路研究苗药金骨莲对类风湿关节炎Tfh细胞分化的分子机制

T-follicular helper (TFH) cells differentiation is responsible for the development of rheumatoid arthritis (RA). Therefore, the critical molecular which enhances Tfh differentiation should be investigated to control RA. STAT3/Bcl6 pathway is critical for Tfh cell differentiation, but the detail underlying mechanism has not been elucidated. Accumulating evidence indicates that Jing Gulian, a traditional Chinese herbal, provided a potential agent for RA. Our recent study indicated that Jing Gulian alleviated the collagen II induced arthritis through inhibiting Tfh differentiation. In vitro assay revealed that Jing Gulian could directly inhibit PARP1 enzyme activity. In addition, PARP1 can promote Tfh cell differentiation via STAT3/Bcl6 pathway in RA. Hence, we intend to investigate the detail mechanism of Jing Gulian regulates Tfh cell differentiation via up- and down- regulated gene expression of PARP1/STAT3/Bcl6 pathway and related rescue assay in vitro, in vivo and in silico respectively. The findings of this study should elucidate the understanding of Tfh cell differentiation in RA, provide a novel therapeutic strategy to control RA and add the experimental evidence for the development of related drugs for RA.

滤泡辅助性T淋巴细胞（Tfh）异常分化在类风湿关节炎（RA）中具有关键作用，寻找抑制Tfh细胞分化的关键因子成为治疗RA的研究焦点。STAT3/Bcl6通路参与Tfh细胞的分化调控，但具体机制仍未充分阐明。有报道称苗药金骨莲可用于RA的治疗。我们前期研究发现，金骨莲通过抑制Tfh细胞的分化进而缓解RA进程。同时，在体外实验中证实该药物对PARP1的活性有抑制作用。PARP1作为STAT3的调节因子，可以激活STAT3/Bcl6进而促进RA中Tfh细胞的分化。基于以上结果，本课题拟从临床、动物、细胞、分子等多层面，采用基因过表达，基因敲降及回复实验干预PARP1及STAT3/Bcl6通路，结合生物信息学分析，深入探讨金骨莲调控PARP1影响STAT3/Bcl6通路从而抑制RA中Tfh细胞分化的具体环节和作用机制，加深RA中Tfh细胞分化作用的认识，为RA的临床治疗提供新线索和新思路。

滤泡辅助性T淋巴细胞（Tfh）异常分化在类风湿关节炎（RA）中具有关键作用，寻找抑制 Tfh细胞分化的关键因子成为治疗RA的研究焦点。STAT3/Bcl6通路是Tfh细胞分化的重要通路，PARP1属STAT3的调节因子，但是如何参与调控STAT3/Bcl6从而影响Tfh细胞分化的机制仍未充分阐明。本研究旨在探讨苗药金骨莲抑制Tfh细胞内的PARP1，调控STAT3/Bcl6减少其分化，缓解RA的分子机制。在本项目中，我们发现，类风湿关节炎患者Tfh细胞内高表达PARP1，且PARP1的表达与疾病程度相关。在动物水平，金骨莲干预可明显减少Tfh细胞分化，减轻CIA鼠关节肿胀，AI指数及关节病理改变，减轻关节炎的程度，进一步，我们通过网络药理学结合生物信息分析，预测金骨莲的作用于RA的通路，结果发现其作用与JAK/STAT通路有关，通过细胞实验及体外酶活实验证实，PARP1在Tfh细胞及MH7A细胞中高表达可通过STAT3/Bcl6产生IL-21，并且PARP1可以与STAT3相互作用，促进关节成纤维样滑膜细胞的迁移和细胞存活。此外，金骨莲可抑制PARP1酶活，模拟PARP1抑制剂通过STAT3/Bcl6，减少MH7A的迁移并诱导其凋亡，该现象可以被PARP1过表达所逆转。金骨莲可抑制PARP1酶活，模拟PARP1抑制剂通过干预PARP1酶活，减少MH7A的迁移并诱导其凋亡，该现象可以被PARP1过表达所逆转。本研究成果表明：PARP1促进Tfh细胞产生IL-21，诱导Tfh细胞分化，加重RA的发生发展，金骨莲可通过抑制PARP1的酶活延缓RA的进程，该研究拓展对RA中Tfh细胞分化分子机制的认识，为RA的临床诊治提供新线索。