甲型流感病毒抗原多表位嵌合病毒样颗粒的构建及其免疫效果研究

流感的大流行往往会引起全球性公共卫生事件，而控制流感的最有效手段是接种疫苗。但因流感病毒易快速变异，疫苗往往对新流行株不具保护性。因此，急需研发一种新型的流感通用疫苗。但因通用抗原表位肽的免疫原性差且易降解，更缺乏有效展示载体，阻碍了通用疫苗的研发。本研究利用"免疫表位数据库"与历年流感代表株做对比，筛选出H1和H3亚型各1个高度保守抗原表位（H1e和H3e），通过Overlap PCR方法重组M2e、H1e、H3e与HPV L1基因片段，插入原核表达载体，表达可展示流感保守表位的HPV L1重组蛋白，并通过电镜验证其形成病毒样颗粒（VLPs）结构。在此基础上，利用这一重组的HPV VLPs免疫小鼠，通过中和抗体效价检测及小鼠攻毒保护试验评估其免疫原性和免疫保护性，从而确定重组HPV VLP可否作为流感病毒新型候选通用疫苗，为建立有效的新型流感疫苗提供新策略。

设计通用的甲型流感病毒疫苗是排除病毒自身变异而导致疫苗株对流行株不具有保护性干扰的重要手段。前期研究表明，以甲型流感病毒基质蛋白膜外区（M2e）为靶点设计M2e表位疫苗能保护多种型别的甲型流感病毒。在青年项目资助下，我们研究结果发现以HPV16主要结构蛋白(L1)形成的病毒样颗粒为载体构建展示了甲型流感病毒抗原表位候选疫苗具有以下特性：①确定了HPV16 L1蛋白在其BC环（loop）和EF环的两个抗原表位插入甲型流感病毒的血凝素保守表位H1e和H3e以及在C-端融合M2e表位时不影响其形成病毒样结构的特性，为进一步确定HPV16 L1蛋白这一现象的普遍性提供了基础；②插入后的H1e和H3e表位以及C-端融合的M2e表位具有很好的免疫原性；③综合①和②，为结构表位的展示提供了新的突破点；④确定了插入甲型流感病毒的血凝素保守表位H1e和H3e以及C-端融合M2e表位的重组HPV16 L1病毒样颗粒可以作为甲型流感病毒通用抗原表位候选疫苗之一。研究数据已经整理为科技论文在Protein Expression and Purification审稿后修改。通过资助，培养硕士研究生1名，发表已标注课题资助英文论文两篇，其中SCI论文1篇发表于Emerging Infectious Diseases权威杂志。