葡萄胎的分子遗传学分型及相关致病基因探索

The hydatidiform mole is a benign trophoblastic disease with malignant potential. Although there are significant differences in the malignant risk of different genetic origin of hydatidiform mole, the clinical manifestations and pathological features of different subtypes, such as biparental complete hydatidiform mole (BiCHM) and androgenetic complete hydatidiform mole (AnCHM) are exactly the same, therefore, the BiCHM can not be distinguished from the AnCHM in the clinic. Familial recurrent hydatidiform mole is a special type of hydatidiform mole. These patients can not have a normal offspring and usually suffer from recurrent spontaneous abortions and hydatidiform moles, which tend to progress to invasive mole or choriocarcinoma. We have more mature experience in the clinical treatment of hydatidiform mole so far; however, due to the limited knowledge on etiology of this disorder, there are still many hurdles for the clinical gynecologists, such as the prevention of recurrent hydatidiform mole, the guidance or consults of the future pregnancy forecasts for these patients. In this study, our specific aims are: 1. to analyze the genetics origin of hydatidiform mole by using molecular genetics methods, microsatellite polymorphism based on microdissection, and to establish a new standard for the hydatidiform typing in the future; 2. to detect the expression levels of imprinted gene in different genetic origin of hydatidiform moles, in order to explore the role of imprinted genes in the pathogenic mechanism of hydatidiform mole; 3.to detect the haplotype of familial recurrent hydatidiform mole to narrow the range of the causative gene, or discover novel pathogenic genes spectrum through genome scan. The outcome of this proposed project will provide theoretical basis for better understanding the pathogenic mechanism, prognosis, prevention, and gene therapy of hydatidiform mole, therefore, will help reduce the incidence of hydatidiform mole.

葡萄胎是一种有恶变潜能的良性滋养细胞疾病，不同遗传学起源的葡萄胎发生恶变的几率存在明显差异，但其临床表现和病理特征均完全相同，因此，临床上无法区分。家族性复发性葡萄胎是葡萄胎的特殊类型，患者通常没有正常后代，且易于发生恶变。目前，临床上对葡萄胎的治疗已有较成熟的经验，但病因不清。因此，对葡萄胎的预防以及患者下次妊娠的预测和指导仍是临床上的棘手问题。本研究拟：1.采用分子遗传学方法对葡萄胎进行遗传学起源分析，为今后葡萄胎的分型提供新的思路和方法；2.在此基础上，对不同遗传学起源的葡萄胎进行印记基因表达水平检测，以探索印记基因在葡萄胎发生中的作用机制；3.以家族性复发性葡萄胎为切入点，进行单体型检测，以缩小致病基因的范围，或通过基因组扫描发现新的致病基因谱。通过本研究，将会为更好地理解葡萄胎的发生机制及其预后评估、并进而指导葡萄胎的预防和为基因治疗提供理论依据，有望降低葡萄胎的发生率。

【研究背景】葡萄胎是一种有恶变潜能的良性滋养细胞疾病，根据组织病理学的不同可分为完全性和部分性葡萄胎两类，前者可根据遗传学来源的不同分为孤雄来源（AnCHM）和双亲来源（BiCHM）。BiCHM通常见于家族性复发性葡萄胎（FRHM），FRHM是葡萄胎的特殊类型，患者通常没有正常后代，且易于发生恶变。以往研究结果推测FRHM是一种常染色体隐性遗传病，目前FRHM发病机制未明，但患者多有印记基因异常，且多数FRHM患者存在NLRP7和（或）KHDC3L不同形式的纯合突变。【研究内容】收集1个FRHM家系及6个复发性葡萄胎（recurrent hydatidiform mole，RHM）家系的临床资料及葡萄胎组织、家系成员外周血标本。对葡萄胎及其双亲进行遗传学起源鉴定；对BiCHM患者及其家系内健康女性、散发性葡萄胎患者的NLRP7和KHDC3L基因外显子测序；检测上述家系成员19q13.4单体型，筛选FRHM家系特有纯合位点内可能的致病基因；对FRHM患者的候选致病基因进行测序，评估其内非同义碱基改变对蛋白功能的影响。【结果】共收集7个家系的12例葡萄胎标本，其中2例为BiCHM，8例为AnCHM，2例为PHM。本研究中所有葡萄胎患者的NLRP7和KHDC3L基因外显子测序未发现致病突变。本研究在已发现的与FRHM密切相关的区域19q13.4中发现5个非连续的纯合性位点,其附近的10个可疑致病基因编码序列共检测出20种非同义碱基改变，其中5种为非同义异形体（NSV），另外15种为可能的突变。这15种非同义碱基改变均来自ZNF264基因，它们导致的单个氨基酸改变对蛋白功能无明确破坏性。【结论】CHM与PHM可以通过病理学和p57KIP2免疫组化鉴别，而BiCHM与AnCHM需通过分子遗传学鉴别。本例中FRHM为BiCHM，但家系中两个女性反复出现葡萄胎妊娠、且父母为近亲结婚者也可能不是BiCHM；同一家系中RHM患者倾向于发生相同遗传学来源的葡萄胎。BiCHM可能存在遗传异质性，除NLRP7和KHDC3L外可能存在其他致病基因。本研究中FRHM可能与ZNF264复合杂合性碱基改变相关，或者可能存在其他致病基因座。本研究的方法可用于鉴定葡萄胎的遗传学起源，19q13.4单体型分析缩小了FRHM致病基因范围，基因测序方法则可用于筛选出可疑的FRHM致病基因。