绒山羊次级毛囊周期性发育相关基因的筛选及功能验证

运用基于mRNA solexa测序技术的数字基因表达谱RNA-Seq分析方法，检测陕北白绒山羊生长期、退行期和休止期次级毛囊的基因差异表达，结合生物信息学分析，筛选与绒山羊次级毛囊周期性发育相关的基因；以筛选的显著差异表达基因为靶基因，构建重组腺病毒RNA干扰载体，转染体外分离培养的生长期、退行期和休止期次级毛囊组织，结合实时定量PCR和Western blot技术，在mRNA水平和蛋白水平上检测靶基因对β-catenin、Shh、Notch-1、TGF-β1、BMP2等调控毛囊发育相关基因mRNA表达丰度和蛋白表达量的影响；运用免疫共沉淀法分析靶基因与β-catenin、Shh、Notch-1、TGF-β1、BMP2等基因的作用关系，探索靶基因在次级毛囊周期性发育过程中的调控作用。旨在揭示绒山羊次级毛囊周期性发育的分子调控机理，为实现人工调控绒毛生长、加快绒山羊遗传育种进展提供理论依据。

运用基于mRNA solexa测序技术的数字基因表达谱RNA-Seq分析方法，检测陕北白绒山羊次级毛囊生长期、退行期和休止期的基因差异表达，结合生物信息学方法筛选与绒山羊次级毛囊周期性发育相关的基因。. 研究结果表明：在生长期、退行期和休止期共筛选出1322个差异表达基因，归类为53个功能类群；生长期与退行期、生长期与休止期的基因表达差异都相对较小，退行期与休止期的基因表达差异较大；共有1129个差异表达基因通过KEGG注释到各种生化代谢途径和信号转导途径。通过实时定量PCR检测和免疫组化技术发现，Lhx2基因和MSX2基因对皮肤毛囊周期周期性变化具有一定的调控作用。. 本项目筛选出次级毛囊不同发育时期的差异表达基因，为深入揭示绒山羊次级毛囊周期性发育的分子调控机理奠定了基础，也能够为实现人工调控绒毛生长、加快绒山羊遗传育种进展提供理论依据。