b-catenin内源性调控蛋白FHL2在EMT和肾脏纤维化中的作用及其分子机制

肾小管间质纤维化和肾小球硬化是肾脏纤维化的主要特征，小管上皮细胞和足细胞的转分化(EMT)是其重要的发生机制之一，Wnt/b-catenin信号通路对小管EMT和足细胞EMT以及肾脏纤维化具有重要的调控作用。已有研究表明，FHL2(Four and a half LIM domains protein 2)是b-catenin的一个内源性调控蛋白。由此设想：FHL2参与了EMT和肾脏纤维化的调节机制。本项目拟从体外和体内两方面，通过研究小管上皮细胞和足细胞中FHL2对b-catenin介导的基因转录的影响，阐明肾脏固有细胞内FHL2对b-catenin信号的调控模式，揭示FHL2的新的生物学功能；通过研究FHL2对小管EMT、小管间质纤维化以及足细胞EMT、足细胞功能异常和肾小球硬化的调节及其作用机制，揭示肾脏内FHL2的新的病理生理学功能，为探索延缓肾脏纤维化进程的新措施提供有益思路。

肾小管间质纤维化是肾脏纤维化的主要特征，而肾小管上皮细胞向间充质细胞转化（epithelial-to-mesenchymal transition, EMT）对于肾小管间质纤维化具有重要意义。β-catenin信号在纤维化肾脏中异常活化，是介导EMT的主要细胞内信号之一。FHL2（four-and-a-half-LIM-only protein 2）为仅有四个半LIM结构域蛋白家族的成员，是细胞内蛋白分子之间相互作用中重要的衔接蛋白和修饰蛋白，并可作为多种转录因子的辅转录因子发挥功能。已有研究提示，在某些其他类型的细胞中FHL2可与β-catenin相互作用并影响β-catenin所介导的基因转录，我们对FHL2在肾小管EMT中的作用及可能机制进行了的研究，主要研究结果如下：(1) 分别在体内外肾小管间质纤维化模型中证实了FHL2的mRNA和蛋白表达均上调，并以体外实验证实TGF-β1诱导肾小管上皮细胞内FHL2的表达主要依赖于细胞内的Smad信号通路。(2) 利用转染特异性表达载体或小干扰RNA（siRNA）的方法上调或下调肾小管上皮细胞内FHL2的表达，并以TGF-β1作为刺激因子和阳性对照，证实FHL2具有促进肾小管EMT的功能。(3) 采用质核分离和免疫共沉淀等技术证实在肾小管上皮细胞内FHL2可与β-catenin相互作用并以此调控β-catenin的信号活性。(4) 证实在肾小管上皮细胞内FHL2能够调控β-catenin所介导的基因转录，并影响β-catenin信号通路下游多种与肾小管EMT相关的靶基因的表达。总之，我们经上述研究初步阐明了FHL2在肾小管EMT过程中的作用以及FHL2通过调控β-catenin信号通路发挥其作用的分子机制。我们的研究对于阐明肾脏纤维化的发病机制以及寻找相关的治疗靶点具有重要的价值。