长白山蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用机制和分子靶点的研究

目前关于蝙蝠葛抗肿瘤作用的研究尚处于初始阶段，报道较少，特别是长白山地区产蝙蝠葛抗肿瘤作用研究尚未见报道。我们已从长白山地区产的蝙蝠葛初步分离得到抗肿瘤活性组分，并进行了探索性实验研究。前期研究结果表明，蝙蝠葛具有较好的体内外抗肿瘤作用。本课题研究的内容为进一步筛选、分离、提取、测定蝙蝠葛抗肿瘤作用的有效部位，并利用现代细胞生物学技术对蝙蝠葛抗肿瘤作用进一步行体外筛选；同时利用分子生物学技术、现代病理学等方法从细胞凋亡、细胞周期、细胞超微结构和分子水平等进一步阐明蝙蝠葛抗肿瘤作用及其诱导凋亡作用机制，通过体内与体外实验相结合、分子水平与宏观大体相结合、功能与形态学相结合的方式系统地探讨蝙蝠葛抗肿瘤作用及诱导凋亡机制，寻找出蝙蝠葛抗肿瘤作用的分子靶点，并分离确定蝙蝠葛抗肿瘤作用的主要生物活性成分。

本项目研究结果表明：1) 蝙蝠葛活性成分对白血病K562细胞株、肺癌A549细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人乳腺癌MCF-7细胞株、小鼠黑色素瘤B16、人胃癌MGC-803、人胃癌SGC7901和人肝癌Hep3B、人肝癌HepG2等9种细胞株均有体外生长抑制作用，而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性；2）蝙蝠葛活性成分对人肺癌A549裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用；3）蝙蝠葛活性成分对S180荷瘤小鼠具有延长生存期的作用，同时对小鼠移植性S180肉瘤具有抑制作用；4）蝙蝠葛活性成分含药血清在体外对人肺癌A549细胞株增殖有抑制作用；5）急性毒性实验结果表明蝙蝠葛活性成分属低毒中药，上述实验表明蝙蝠葛活性成分具有良好的体内外广谱抗肿瘤作用；6) 蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用的分子靶点是通过抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡来实现的；7）蝙蝠葛活性成分诱导凋亡作用是通过下调bcl-2 、Survivin以及Livin蛋白表达 , 上调Bax、Fas、NF-κB、Syk、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达，经由细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路完成凋亡的启动和执行；8）蝙蝠葛活性成分对细胞周期的影响机制可能与下调CyclinD1、Ki-67蛋白的表达，上调候选抑癌基因Syk、P16蛋白表达有关，并且可以使该肿瘤细胞在S期聚集，阻止了肿瘤细胞向G2/G0期的转换，从而干扰细胞周期的进程；9）蝙蝠葛活性成分能使人胃癌SGC-7901细胞的黏附能力、迁移运动能力、侵袭能力下降；其抑制人胃癌SGC-7901细胞转移侵袭作用可能与下调MMP-2蛋白的表达，上调Nm23蛋白的表达有关。通过本项目研究已达到预期目的，本实验结果显示出蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用的巨大潜力，为长白山天然抗肿瘤药用植物的开发提供理论和实验依据，蝙蝠葛活性成分具有抑制增殖、诱导凋亡和抑制侵袭作用，有望开发成一种新的抗肿瘤药物。