Neuropilin-1 调控肝星状细胞PDGF信号通路在肝癌微环境中作用研究

肿瘤微环境在肿瘤发生、发展过程中起有重要作用，NRP-1在肿瘤血管生成和侵袭转移中的研究才处于起步阶段，多集中在VEGF方面。本研究针对肝癌微环境中的血管周细胞-肝星状细胞（HSC）。我们既往研究证实NRP-1作为PDGF的共受体，可增加HSC表面PDGF-Β/PDGFR-β结合，由此设想NRP-1与PDGF结合后通过细胞内下游MAPK、PI-3K及Rac-1信号通路首先增强HSC的活性，而后HSC作用于肿瘤细胞，促进肿瘤细胞的侵袭及转移。本课题将通过组织学、细胞活性、信号通路及HSC与肿瘤细胞共培养等实验证实上述设想。在此基础上，建立裸鼠HSC与肿瘤细胞共注射皮下肝癌移植瘤模型，体内实验证实阻断HSC NRP-1转导将抑制肝脏肿瘤生长。本研究将阐明NRP-1对HSC的作用机制及其在肝脏肿瘤微环境中所起作用，并将寻找相应的治疗方法，对于肝癌的研究具有重要的科学价值。

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，近年来研究发现肿瘤微环境在肿瘤发生发展过程中起到了至关重要的作用。本课题研究针对肝脏肿瘤微环境中特异性的血管周细胞-肝星状细胞（hepatic stellete cells，HSC），探讨Neuropilin-1通过肝星状细胞PDGF信号通路在肝癌微环境中作用机制。已完成的研究工作包括：（1）组织学实验证实Neuropilin-1与PDGFR-β、α-SMA在肝硬化、原发性肝癌肝星状细胞中高表达，提示了Neuropilin-1可作为PDGF的共受体促进肝星状细胞的活化；（2）通过原代培养获得小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）及与肿瘤细胞共培养，证实肿瘤相关成纤维细胞具有促进肿瘤细胞增殖，抑制肿瘤细胞凋亡的作用，小鼠胚胎成纤维细胞可以作肿瘤相关成纤维细胞用于肿瘤微环境的研究；（3）活化的肝星状细胞LX2可促进肝癌细胞HepG2增殖及侵袭能力，索拉菲尼可通过抑制α-SMA的表达、抑制肝星状细胞PDGF下游信号转导通路（PI-3K，Ras）及下调肝星状细胞上清液中的PDGF-BB和TGF-β1的表达，抑制HSC的活化，继而抑制HepG2的增殖及侵袭；（4）构建了人NRP-1基因重组腺病毒载体及人NRP-1基因小分子干扰RNA慢病毒载体，为进一步研究NRP-1基因在肝星状细胞促进肝癌发生发展中的作用提供基础。（5）PDGF增加HSC的趋化性，NRP-1 siRNA 抑制PDGF介导的HSC趋化性，NRP-1 过表达腺病毒载体增加PDGF介导的HSC迁移，可被Imatinib(PDGFR-β阻滞剂)抑制。（6）NRP-1 对PDGF介导的HSC PDGF下游蛋白级联磷酸化反应信号通路的研究，结果证实NRP-1增加PDGFR-β的磷酸化与Rac-1的活性，与MAPK及PI-3K通路无关。（7）体内实验证实HSC可促进HCC基质产生与沉积，并通过促进肝癌细胞增殖、抑制肝癌细胞凋亡从而促进HCC的生长。.NRP-1作用于HSC的上清液与肝癌细胞共培养实验，NRP-1作用于PDGF介导的HSC与肿瘤细胞共注射对裸鼠皮下移植性肝癌生长的影响研究正在进行中。.本研究截止目前共完成文章9篇，已发表2篇，其中综述2篇，培养硕士研究生5名，已毕业4名。.综上，本研究从肿瘤微环境肝星状细胞角度进一步阐明了肝癌发生机制，基本达到预计目标。